Golovna Simptomi Kako izvršiti PCR dijagnostiku Analiza pomoću PCR metode. Visoka osjetljivost istrage

Kako izvršiti PCR dijagnostiku Analiza pomoću PCR metode. Visoka osjetljivost istrage

PLR (polymerase Lanzug reakcija) je dostignuće molekularne biologije, jedna od glavnih metoda kliničke laboratorijske dijagnostike krajem 20. i početkom 21. vijeka, koja nanosi veliku štetu različitim pacijentima medicinske nauke.

Na taj način, kao usred miliona ćelija ljudskog tela, nije uništen sam živi virus, već samo deo njegove DNK, onda PLR, kako se ne može mučiti, možda pokušava izbjeći zadatak i obavijestiti o prisutnosti „vanzemaljaca“ „pozitivan rezultat. Suština PLR-a je njegova glavna prednost.

Hidratacija i nedostaci

Laboratorija koja obavlja PLR dijagnostiku ima veliku potrebu za dostupnošću test sistema i kvalifikacijama medicinskog osoblja. Riječ je o visokotehnološkoj laboratoriji koja ima dobro uređen arsenal visoko osjetljivih i visoko specifičnih reagensa, tako da nema posebnih nestašica. Sve što pokazuje pozitivan rezultat u odsustvu kliničkih manifestacija i time stavlja doktora pred dilemu: da li da počnemo sa lečenjem ili ne?

Doktor koji brine o pacijentu počinje sumnjati u pouzdanost rezultata testa, sve dok nema znakova bolesti. Međutim, visoka osjetljivost PLR sustava temelji se na sjećanju da otkriva poziv za buđenje u pretkliničkoj fazi, a pozitivan rezultat u ovom slučaju je prije godinu dana, a ne daleko. Na osnovu toga, doktor je odgovoran za donošenje sopstvenih odluka o korisnosti terapije, uzimajući u obzir druge argumente „za“ i „protiv“.

Prednosti dijagnostike pomoću Lanziugove reakcije polimeraze su očigledne:

Visoka specifičnost, koji dostiže 100%, nastaje zbog prisustva u uzorku čestica nukleinskih kiselina koje su moćne u određenom organizmu, ili stranih ljudima;
Visoka produktivnost, pa čak i PLR je visokotehnološka automatizirana tehnika koja omogućava provođenje testiranja na dan prikupljanja materijala i rutinsko liječenje pacijenta u slučaju bilo kakve anksioznosti;
PLR, radeći na jednom kvaru, može provesti niz istraga o otkrivaju brojne praznike kao da bi ona bila takvo blago. Na primjer, prilikom dijagnosticiranja klamidijske infekcije, kada se PLR primjenjuje na glavne metode, u cilju klamidije, može se otkriti Neisser (gonokok) - alarmist. Štaviše, nema negativnog uticaja na pouzdanost rezultata;
Testiranje pomoću PLR metode otkriva nesigurne mikroorganizme tokom perioda inkubacije Ako bolest još nije stigla do kraja tijela, tada rana dijagnoza predviđa budući razvoj patološkog procesa, što omogućava pripremu za nešto novo i prihvaćanje iz cjeline.

Osim toga, kako bi se otklonila zabuna koja ponekad nastaje prilikom dijagnosticiranja, PLR se štiti činjenicom da se njegovi rezultati mogu snimiti (fotografija, kompjuter) metodom vikorizacije kod stručnjaka u svrhe koje mogu biti neophodne.

Norma kod PLR tipova je da se vrednuju negativni rezultati, što ukazuje na prisustvo fragmenata stranih nukleinskih kiselina, pozitivan dokaz ukazuje na prisustvo infekcije u organizmu, digitalne vrednosti ukazuju na snagu virusa i njegovu koncentraciju u trenutku testiranja. Proteo je eksterno dešifrovao analizu ovog doktora, koji je uradio posebnu studiju na temu “PLR”. Nema smisla pokušavati samostalno tumačiti rezultate, jer možete, šta će biti sa svime, pogrešno shvatiti i početi se hvaliti.

Čega se PLR boji, šta može i kako se možemo pripremiti za to?

Kao i svaka druga istraga, Ponekad su rezultati testa ili pozitivni ili negativni, de PLR nije kriv. U ovakvim situacijama može se dogoditi sljedeće:

Poremećaj tehnološkog procesa do jedne od faza reakcije;
Nedotrimanya pravila za sakupljanje materijala, njegovu konzervaciju i transport;
Prisutnost elemenata trećih strana u materijalu.

Odnosno, prije PLR - dijagnostike infekcija, potrebno je pristupiti s poštovanjem, oprezno i precizno, inače materijal može promijeniti svoju strukturu ili potpuno propasti.

Faze PLR dijagnostike. Milkovljevi rezultati mogu biti poremećeni u bilo kojoj fazi istrage.

PLR dijagnostika infekcija spada u kategoriju “zlatnih standarda” među ostalim laboratorijskim metodama, pa se mogu koristiti za otkrivanje svakodnevnih bolesti bogatih, koje na prvi pogled ne sugeriraju ništa značajno. kao ja:

Tuberkuloza različitih lokalizacija, upala pluća (uključujući atipičnu upalu pluća uzrokovanu klamidijom);
Dječje infekcije (kravlja rubeola, zaušnjaci, cvrkut);
Difterija;
Salmonella;
Zoonoza zarazna bolest - listerioza (bolest karakteriziraju različiti simptomi zbog oštećenja limfnih čvorova, centralnog nervnog sistema, unutrašnjih organa);
Bolest uzrokovana Epstein-Barr virusom (infektivna mononukleoza, itd.);
Onkološka patologija, izazvana infekcijom papiloma virusom (IDP ovog tipa);
Borelioza (lajmska bolest, krpeljni encefalitis);
Helicobacter pylori infekcija, uzrokovana mikrobom Helicobacter pylori, koji živi u vulvi osobe. Dokazano je da Helicobacter pylori izaziva razvoj karcinoma skutuma ili 12-cifrenog debelog crijeva;
i praktično sve.

PLR-dijagnostika infekcija koje se prenose od strane države posebno je važna kada fragmenti bolesti, urlajući, često prođu težak sat bez ikakvih kliničkih manifestacija, zatim, kada počne težina, počinje aktivnost. , na takav način ugroziti zdravlje i uništiti život djeteta. Koristite i na isti način. Radnje od njih („baklja“) se postavljaju odmah i do ÍPŠ, a ostale zahtijevaju razmatranje izvještaja. Više o najpopularnijim metodama možete saznati u sljedećim odjeljcima članka.

Kako se pravilno pripremiti za pouzdan rezultat?

Važno je napomenuti da je priprema za PLR jednostavna i ne uključuje poseban napor od strane pacijenta. Potrebno je potpisati tri nezgodna zadatka:

Nemojte kontaktirati članak 24 godine prije datuma analize;
Da biste sakupili i analizirali krv iz vene, morate doći do čamca posta, ali ne možete piti dok ne progovorite;
Dajte mi ga što pre (u sterilnu teglu, stavite ispred apoteke).

PLR se može izvesti u bilo kojem biološkom okruženju

PLR metoda ne ometa "krvožednost"; koristi biološki medij za sprječavanje prijenosa infektivnih agenasa. odaberite – ono što je potrebno poduzeti za dalju istragu biće poslato ljekaru.

Na ovaj način, u potrazi za alarmom, pored analize krvi (iako možemo pristupiti i, u većini slučajeva, nastaviti paralelno sa drugim materijalom), možete vikorizirati:

(Vizija urogenitalnog trakta);
komadić sluznice usta, konjunktive, nazofarinksa i arterija (za žene uzeti iz grlića materice i muskulature, za muškarce iz uretre);
Slinu;
sperma;
od prednje loze;
Placentno tkivo i amnionska tečnost (amnionska tečnost);
Sedimentacija (nakon centrifugiranja), na primjer, za identifikaciju tipova IPSS-a i mikobakterije tuberkuloze;
Sputum i pleuralna tečnost sa istom supstancom;
exudati;
Kičmena moždina ako postoji sumnja na infektivnu leziju centralnog nervnog sistema;
Biopsijski materijal (bioptat), uzet iz jetre, crijeva s 12 kandži, scute itd.

Prije navedenog, želio bih dodati da će materijal za testiranje u svim slučajevima, u struganjima i u zapažanjima, biti dovoljan, neka testiranja PLR metodom ne zahtijevaju mnogo truda, analiza je ograničena na mnogo Mikrolitre treba uzeti iz mikroepruvete tipa ependorf i poslati u Vivchennia.

Bolest i stagnacija PLR

VIL i Lanzugova reakcija polimeraze

Ako ste podvrgnuti anonimnom testiranju i imate pozitivne rezultate, imunobloting dijagnostiku treba ponoviti ponovo. Nakon što je dijagnoza potvrđena, pacijentu se propisuju dodatne pretrage:

Na osnovu dodatnih imunoloških reakcija apsolutnih vrijednosti broja limfocita CD 4 (imunokompetentne ćelije - T-pomoćnice ili ćelije bubrega), koja nas infekcija prva pogađa, nakon čega se konzumiraju njihovi glavni autoriteti ne mogu uništiti „svoje ”i nečijeg drugog.” RNK virus koji cirkuliše u krvnoj plazmi pogrešno se smatra normalnim ćelijama u telu i ne reaguje na njih;
Detekcija RNA virusa metodom PLR i distribucija koncentracije virusnih čestica na osnovu stadija, težine patološkog procesa i prognoze zasnovane na balansu ovih podataka. Očigledno, riječ "norma" nedostaje u planu, tako da je reakcija uvijek pozitivna, a dešifriranje digitalnih vrijednosti spada u nadležnost liječnika.

PLR i hepatitis

PLR metodom se može otkriti hepatitis, najčešće se test koristi za dijagnosticiranje hepatitisa, koji se drugim metodama loše dijagnosticira.

Virus hepatitisa C (RNA) odgovoran je za njegovo ponašanje u ljudskom tijelu. Zabijen u genom ćelija jetre (hepatocita), on ostaje tamo u pravo vrijeme, koje može doći za 2 ili 20 godina, pa ga doktori nazivaju „mrtvim ubicom“. Hepatitis C dovodi do razvoja malignog procesa u parenhima jetre, koji se manifestuje u kasnijim fazama. Imuni sistem ne obilježava sve ovo, griješi virus sa hepatocitom. Međutim, u mnogim slučajevima se stvaraju antitijela na virus i ne štite imuni sistem. Za dijagnosticiranje ELISA za hepatitis C nije baš informativan, jer ukazuje na to da je virusu izgubio tragove, a da li je i sam zaražen nije poznato. U slučajevima HCV infekcije dolazi do samoizumiranja, jer se antitijela protiv virusa gube i nastavljaju da cirkulišu zauvijek (imuno pamćenje). PLR značajno prethodi stvaranju antitijela i može otkriti virusnu česticu u roku od 1-1,5 dana, dok se AT može pojaviti u intervalima od 2 mjeseca prije porođaja.

PLR dijagnostika u slučajevima kada se sumnja da se virus hepatitisa C širi u ljudskom tijelu je najoptimalnija metoda istraživanja, jer je jedino moguće prepoznati prisustvo „zakonskog neprijatelja“ u krvi ili biopsiji jetre pacijenta enta .

Međutim, ponekad može doći do napada ako je AT pozitivan, a PLR rezultat negativan. Ova metoda se koristi kada je virus vrlo niskog intenziteta ili kada „uspava“ ulazi u jetru bez ulaska u krvotok. Da bi se saznala istina, od pacijenta se uzima ponovljena analiza, ili čak više od jedne.

Infekcija papiloma virusom

Kako do samoinfekcije ne može doći, moguće je, ne pokazujući ništa samome sebi, dugo vremena opstajati u tijelu vladara, za kojeg ne sumnjam u cijenu, pošto PLR fragmenti nisu razvijeni, a simptomi bolesti bili su svakodnevni. Međutim, prisutnost infekcije papiloma virusom, bilo latentna ili latentna, daleko je od dobrog za zdravlje osobe, a posebno je opasno nositi tip virusa koji uzrokuje rak (tipovi 16, 18).

Najčešće polovina populacije boluje od IDP-a, jer virus češće pogađa ženski dio tijela, a posebno grlić maternice, gdje različite vrste virusa uzrokuju razvoj displastičnih procesa, a potom i raka grlića materice, kao i ne tolerisati displaziju i dati slobodu virusu. Tako osa, polimerazna Lanzugova reakcija otkriva virusnu DNK, a zatim se ili „loš“ ili „dobar“ (onkogeni ili neonkogeni) tip nastani u tijelu žene.

Druge IPSS i TORCH infekcije

Očigledno je da Lanczugova reakcija polimeraze može otkriti bilo koju stranu strukturu koja je formirana od nukleinskih kiselina, što test čini pogodnim za identifikaciju svih SPS i TORCH infekcija, koje nisu uvijek otkrivene. Da li je moguće provesti tako skupe pretrage za identifikaciju gonokoka, koji su dostupni i jeftiniji?

TORCH infekcije i IPSS su međusobno povezani, tako da je važno odrediti koje grupe treba dodijeliti jedna drugoj. Može im biti teško da odrastu, jer neće biti izloženi različitim grupama mikroorganizama, koje država može prenijeti, bilo samo za mlade umove (imunodeficijencija), ili mogu postati manje interesantni zbog važnosti mogućeg negativan priliv tokom trudnoće i trudnoće.

PLR je glavna metoda za otkrivanje stečenih infekcija

Razvoj kliničkih manifestacija zasniva se na različitim faktorima, koji su determinisani snagom samo PLR, što su glavni zadaci, kako kod ELISA tako i kod kao pojedinačni potvrdni test, posebno za simptome bolesti. Ovako teška situacija može biti uzrokovana polimikrobnom infekcijom, koja osim očiglednih bolesti uključuje i mentalne patogene.

Ureaplazma se najčešće javlja kod parova sa mikoplazmom. Nije uzalud. Ove vrste, poput klamidije, nisu ni virusi ni bakterije, žive u sredini ćelija i mogu se povezati sa IPSS-om, iako je njihova prisutnost u zdravom tijelu također daleko od neuobičajenog. Dakle, da bi se bolesnoj osobi uklonio zdrav nos, potrebne su posebne metode, a PLR se smatra najpouzdanijim, uzimajući u obzir posebnosti ponašanja ovih mikroorganizama itd., a istraživanja su neučinkovita.

U čemu je stvar (tip 1, 2) i što se također odnosi na herpesvirus (tip 5), onda je situacija ovdje dvosmislena. Stopa zaraze zemaljske populacije približava se 100%, pa je u ovom periodu veoma važno identifikovati virus i njegovu dozu, koja posebno igra ulogu u virulenciji, a čak i kod odraslih, virus živi u njegovom telu, on često ne popušta žeđi i ne daje znake bolesti.

Stoga ne treba zanemariti liječnički recept za takvu reakciju, a čak je u nekim slučajevima i polimerazna Lanzugova reakcija obavezna i neophodna metoda laboratorijske dijagnostike, koja može zaštititi od ozbiljnih komplikacija ne samo nku, već i malu osobu, kao da se još nije rodila.

Željeli bismo razumjeti da takva čudesna metoda kao što je PLR služi čovječanstvu više od 30 godina. Kada se radi ovaj test, ne treba biti ograničen rizikom od zaraznih bolesti. Reakcija polimeraze Lanzug, popularizirana u području molekularne biologije, neraskidivo je povezana s genetikom. uspješno kontaktira kriminalističkog istražitelja da identifikuje određenu osobu, u brodskoj medicini za osnivanje veterinarske medicine, u veterini, kao ambulanta za životinje može kupiti nekretnine na putu, kao iu drugim oblastima (industrija, seoska uprava itd.).

Video: PLR - suština te stagnacije

Genetika bakterija Informacije za drugu aktivnost.

Reakcija polimeraze Lanzug

Reakcija polimeraze Lanczug je metoda koja omogućava veliko povećanje (amplifikaciju) broja DNK molekula u uzorku koji se analizira (uključujući u biološkom materijalu ili čistoj kulturi).

Glavne prednosti PLR-a kao dijagnostičke metode u mikrobiologiji su njegova vrlo visoka osjetljivost, koja omogućava otkrivanje ekstremno niskih koncentracija patogena u uzorcima, kao i regulirana specifičnost, koja omogućava otkrivanje bilo kojeg bića na generičkom , vrsta ili podspecifični nivo. Glavni dio PLR-a je zbog njegove visoke osjetljivosti - uzorci mogu lako kontaminirati DNK iz pozitivne kontrole, ili PLR proizvoda, što će dovesti do negativno-pozitivne reakcije. Ovo nameće ozbiljna ograničenja umovima u kojima se vrši mešanje PLR-a i rad sa gotovim PLR proizvodima.

Proveden PLR. Priprema se reakciona smeša koja kombinuje sledeće komponente:

Video sam DNK iz tragovanog uzorka,

Buferny Rozchin

Mg2+ joni (neophodni za enzim),

Dva prajmera su jednolančani kratki DNK molekuli (najčešće dugi 18 do 24 nukleotida), komplementarni krajevima različitih DNK sekvenci koje se detektuju.

Sumish deoksinukleotid trifosfati.

DNK polimeraza otporna na toplinu (najčešće vikorizirana Taq polimeraza - polimeraza viđena u Thermus aquaticus).

Tada se ova reakcija može staviti u pojačalo, koje je zapravo programirano od strane termostata. U pojačalu se izvodi 30-40 ciklusa promjena temperature. Koža iz ovih ciklusa sastoji se od tri faze (div. sl. 1):

Denaturacija (temperatura 94°W) – vodena koplja pucaju, a DNK koplja se razilaze.

Prajmeri su pali (temperatura je oko 50-60°C) – prajmeri se dodaju na krajeve sekvenci DNK. U međuvremenu, na niskim temperaturama, porast izlaznih DNK lanaca iz ucrtanog fragmenta (renaturacija) je energetski povoljniji, zbog koncentracije prajmera u reakcionoj smjesi za više reda veličine. sekvence (na primjer, na ciklusima cob PLR), reakcija prajmera se nastavlja sa smanjenjem DNK. Temperatura topljenja se bira na osnovu temperature topljenja (denaturacije) prajmera.

Elongacija (temperatura je 72 °C) – DNK polimeraza proizvodi prajmere dugog DNK matriksa. Temperatura ukazuje na optimalnu temperaturu za proizvodnju vikorizirane DNK polimeraze.

Otkrivanje rezultata varira u različitim verzijama PLR-a i opisano je u odeljku „Vrste PLR-a“.

Dinamika PLR-a

U ranim PLR ciklusima, određeni broj dvostrukih molekula DNK, čija je veličina određena pozicijom između mjesta slijetanja prajmera, stupaju u interakciju sa ciklusom kože. Na taj način se stvara mali broj postojećih molekula DNK koji se mogu ekstrahovati (div. sl. 2).

Dakle, u ranim ciklusima, snaga PLR proizvoda opisuje se formulom m*2 n, gdje je m prinos DNK uzorka, n broj ciklusa. Tada reakcija dostiže plato. To se događa akumulacijom produkta reakcije, smanjenjem koncentracije prajmera i deoksinukleotid trifosfata, kao i povećanjem koncentracije pirofosfata (slika 3).

Riznovidi PLR

Konvencija PLR

U ovoj verziji PLR reakcije zatim se bira broj ciklusa (30-40), nakon čega se analizira da li se akumulacija vulkanskih molekula DNK nakupila u reakcijskoj smjesi.

Ova opcija za postavljanje PLR u slučaju proširenih vena kao dijagnostička metoda je jasna metoda. Pozitivna reakcija ukazuje na prisustvo tragova DNK molekula koji se nalaze na slici. Negativna reakcija na obavještavanje o postojanju. Kvantitativna procjena izlaznih molekula DNK je nemoguća kroz odgovor na plato.

Glavna metoda identifikacije proizvoda je elektroforeza na agaroznim ili poliakrilamidnim gelovima. PLR proizvodi se razdvajaju u gelu pod električnim poljem kako bi se smanjila njihova molekularna težina. Gel sadrži interkalirajuću žutiku (fluorescentnu u DNK-vezanom stanju - najčešće bromid etid). Tako će, kada se izloži ultraljubičastom svjetlu, biti moguće otkriti prisustvo ili prisustvo oznake koja ukazuje na DNK potrebne molekularne mase. Tokom sata sprovođenja PLR u dijagnostičke svrhe, uvek se postavlja pozitivna i negativna kontrola reakcije, što rezultira istim znacima (div. sl. 4).

PLR u realnom vremenu

U ovoj verziji proizvodnje PLR-a, jačina PLR proizvoda u reakcijskoj smjesi se bilježi kontinuirano tokom reakcije. Ovo omogućava stvaranje krivulje reakcije (div. Slika 3) i, polazeći od nje, izdvajanje više različitih molekula DNK iz čestica.

Jedan od tipova PLR-a koji se izvodi u realnom vremenu je korištenje vikorističkog interkalacionog agensa, koji se dodaje direktno u reakcionu smjesu (najčešće vikoristički SYBRGreen). Drugi tip je upotreba jedne od vrsta fluorescentnih sondi, koje su povezane sa prostorom u sredini PLR proizvoda, što omogućava povećanje specifičnosti detekcije (div. sl. 5). Detekcija fluorescencije se vrši kontinuirano tokom reakcije.

Pored mogućnosti brzog otkrivanja, otkrivaju se i druge prednosti PLR-a u realnom vremenu u skladu sa konvencijom. Ova verzija PLR-a je jednostavnija, brža, a takođe ne zahteva otvaranje cevi sa PLR proizvodima, što smanjuje kontaminaciju drugih čestica. Glavni nedostatak su veće performanse pojačala zbog povećane sposobnosti detekcije fluorescencije u odnosu na original.

Digital Kilkisna PLR

Nova, skupa i još uvijek malena varijanta PLR-a, koja omogućava preciznije određivanje snage DNK u uzorku. U ovoj verziji, reakcija smjese, koja sadrži fluorescentnu berbicu, podijeljena je na veliki broj mikroskopskih volumena (na primjer, kapljice u emulziji). Nakon PLR-a, analizira se koji dio kapljica ima pozitivnu reakciju i, po svemu sudeći, uočava se fluorescencija. Ovaj dio će biti proporcionalan broju DNK molekula koji se nalaze u svakom pojedincu.

PLR iz reverzne transkripcije

Prije ove ili druge verzije PLR-a, reakcija reverzne transkripcije (RNA u DNK) uz pomoć enzima revertaze je inhibirana. Dakle, ova metoda omogućava preciznu identifikaciju RNK molekula. Ovo se može koristiti za otkrivanje RNA virusa ili za određivanje nivoa transkripcije (mRNA) određenog gena.

Malyunok 1. Etapi PLR. Prajmeri su označeni crvenom bojom.

Malyunok 2. Akumulacija dvostrukih DNK molekula, okruženih prajmerima, tokom PLR.

Malyunok 3. Dinamika PLR reakcije pri različitim koncentracijama molekula DNK pronađenih u uzorku. (a) – najveća koncentracija (b) – srednja koncentracija (c) – najniža koncentracija

Malyunok 4. Agarozna elektroforeza PLR proizvoda. K+ - pozitivna kontrola (iza prisustva DNK koja se otkriva). 1-7 - daljnji tragovi (od kojih su 1-2 pozitivni, 3-7 - negativni). K-negativna kontrola (video DNK sukana DNK). U mnogim slučajevima, pored cijelog proizvoda, vidljivo je više svjetlosnih nespecifičnih reakcijskih proizvoda (prajmer dimera).

Malyunok 5. Metode detekcije ispod sata vikoristannya PLR u satu. (a) – interkalirana bebica – fluorescira kada je vezana za dvolančanu DNK (b) – Taqman sonda – fluorescencija se javlja kada se DNK sonda cijepa od strane DNK polimeraze s 5'-3' endonukleaznom aktivnošću za hendikep fluorescentne membrane i sredstvo za gašenje. (c) – MolecularBeacon sonda - fluorescencija se pojavljuje tokom hibridizacije sonde sa cijelim fragmentom izvan prostora udaljenog fluorofora i aparata za gašenje (d) – LightCycler sonde - fluorescencija akceptora se pojavljuje tokom hibridizacije sondi prenesenih nya (FRET).

Lančana reakcija polimeraze (PLR, PCR) je metoda za uklanjanje anonimnih kopija DNK fragmenata (gena) iz biološkog virusa.

Suština PLR-a kao metode molekularne biologije leži u velikoj kopiji uzorka gena pjesme (DNK ekstenzija) uz pomoć posebnih enzima u mozgu. in vitro. Važna karakteristika PLR-a je uklanjanje kopije specifičnog dijela DNK (gena), koji odgovara datom umu. Sinonim za proces kopiranja DNK je “amplifikacija”. DNK replikacija in vivo Možete koristiti i pojačanje. Međutim, kao rezultat replikacije, kratki dijelovi DNK (maksimalno 40.000 parova nukleotida) se pojačavaju tokom Lancugove polimerazne reakcije.

Osnovni principi

Takođe, PLR je karbonazno kopiranje DNK fragmenata in vitro tokom temperaturnih ciklusa koji se ponavljaju. Kako se proces reakcije odvija unutar jednog temperaturnog ciklusa?

Sintezu nukleotidnog lanceta vrši enzim DNK polimeraza. Međutim, da bi klip funkcionirao, enzimu je potrebna početna platforma. Poput Majdana, "prajmeri" (sjeme) djeluju kao sintetički oligonukleotidi sa ukupno 15-20 nukleotida. Postoje dva prajmera (prednji i reverzni), oni su komplementarni delovima DNK šablona, a sam fragment DNK, okružen prajmerima, kopira DNK polimeraza. Rad polimeraze leži u sekvencijalnom dodavanju nukleotida komplementarnih sekvenci DNK šablona. Sam Tim, u jednom temperaturnom ciklusu, ponovo sintetizira dva nova fragmenta DNK (pošto je molekul DNK Dolantsjužkova, onda postoje dvije matrice). Dakle, tokom 25-35 ciklusa, uzorak akumulira milijarde kopija DNK dijagrama identificiranog prajmerima. Struktura zatvorenog ciklusa može se predstaviti na sljedeći način:

Denaturacija DNK (topljenje, dezintegracija DNK koplja) – 95°C – 1 ili 2 hvilina;
pad prajmera (prajmeri se vezuju za DNK šablon, temperatura ove faze je određena nukleotidnim sastavom prajmera) - 60°C (na primer) - 1 hvilina;
Elongacija DNK (polimeraza sintetiše DNK) - 72°C - 1 sat (ostaviti sat vremena dok se fragment ne sintetiše).

Praktična osnova za testiranje metode polimerazne Lanziugove reakcije u laboratoriji mora se sastojati od:

(ili kako se još zove termalni ciklus);
sistemi za s (za vizualizaciju PLR rezultata);
sistemi (za analizu rezultata PLR);
(Za pripremu uzorka);
set (mehanički i elektronski).

Pored glavne i pomoćne opreme za potpuno funkcioniranje PLR laboratorije, postoje potrebni materijali: sterilni vrhovi, epruvete, stalci za epruvete i dozatori.

Baza reagensa u početnoj PLR laboratoriji za izvođenje potpune Lancugove reakcije polimeraze uključuje enzim DNK polimerazu s puferom, prajmere (male sintetičke DNK fragmente komplementarne stabljici i kraju analiziranih dijelova DNK matrice), sumu nukleotidi (A, T, G, C). Prečišćena voda je takođe apsolutno neophodna.

Prednosti PLR metode

Visoka osjetljivost istrage

Osetljivost metode je takva da se amplifikacija PLR-a i identifikacija ciljne sekvence mogu postići u slučaju da se to dešava jednom na svakih 5 ćelija.

Specifičnost analize

PLR omogućava detekciju DNK specifičnog infektivnog agensa u prisustvu DNK drugih mikroorganizama i DNK organizma domaćina, kao i genotipizaciju. Posebnim odabirom reakcionih komponenti (prajmera), možete odmah otkriti DNK srodnih mikroorganizama.

Svestranost PLR metode

Desno, za PLR-dijagnozu infektivnih bolesti i zaraznih bolesti kod ljudi, mogu se koristiti ista znanja, pratiti univerzalne procedure za pripremu uzoraka (uzoraka) i izvođenje analiza, kao i slični kompleti reagensa.

Ušteda vremena

Važna prednost PLR-a je broj faza kulturnog mikrobiološkog rada. Priprema uzoraka, provođenje reakcija i analiza rezultata maksimalnog reljefa i dosta automatizacije. U svakom slučaju, rezultati mogu brzo pasti na 4-5 godina.

Efikasnost PLR metode

Širina proučavanog kliničkog materijala

Kao rezultat reakcije polimeraze Lanczyg, iz bolesti se može ukloniti ne samo biološki materijal, već i mnoštvo drugih supstrata, u kojima se molekule DNK mogu identificirati s visokim zamorom, na primjer, voda, tlo, prehrambeni proizvodi, mikroorganizmi. , i mnogo više.

Sve najvažnije prednosti ove jedinstvene metode su visoka osjetljivost i specifičnost, identifikacija infektivnog agensa i genotipizacija bilo kojeg ljudskog gena, visoka efikasnost i ušteda vremena, univerzalnost Nema praktične osnove - trenutna PLR metoda može se široko koristiti u kliničkoj dijagnostici , medicinska praksa, te naučna istraživanja i bogatstvo u drugim oblastima.

Zastosuvannya PLR

Područja stagnacije Lancugove reakcije polimeraze kao rezultat postojeće metode molekularne biologije su raznolika. Bogata je širinom materijala koji se može analizirati (predmet istraživanja može biti gotovo sve iz čega se jasnije vidi DNK), kao i odabranim prajmerima. Glavna područja implementacije PLR-a:

klinička medicina

ekologija

praćenje razvoja dovkile
analiza prehrambenih proizvoda
analiza genetski modifikovanih organizama (GMO)

brodska medicina i forenzika

Individualna identifikacija
uspostavljanje Otadžbine

farmakologija

veterinarska medicina

naučna istraživanja (molekularna biologija, genetika)

Organizacija PLR laboratorije

Informacije za ugovaranje

Ime	O nama	Virobnitstvo	Metoda	Kat.br.

PLR - dijagnostika infekcija, trenutna i precizna metoda otkrivanja raznih zaraznih bolesti. Koja je razlika između ostalih analiza?

Ova skraćenica se dešifruje kao Lanzugova reakcija polimeraze. Prema Wikipediji, Keri Mullis je rođena 1983. godine u američkoj istoriji. Za svoj doprinos uskraćena mu je Nobelova nagrada.

Posljednji put, PLR je pobijedio samo uz naučnu metodu, nakon čega ga je medicina uspješno ustanovila. Suština istraživanja je u prepoznavanju infektivnog agensa na osnovu DNK i RNK. Kožna bolest, prodirući u DNK, mijenja svoju strukturu u drugu vrstu. Pri samom pogledu na izmijenjenu DNK, laboratorijski asistent postaje svjestan kako se bolest javlja kod ljudi. Između ostalih prednosti PLR-a:

Identifikacija primarnog uzroka infekcije kojoj se izgubio „trag“ u DNK. Kada se identifikuju mnoge bolesti, važno je identifikovati one od kojih je sve počelo. A za ispravnu dijagnozu i izbor efikasnog lečenja, Lanzugova reakcija je od ogromne važnosti;
Instalira se na PLR kako je DNK promijenjen i u određenoj fazi transformacije. Ovo je neophodno kako bi se isključile sumnjive infekcije;
PLR dijagnostika je osjetljiva i otkriva prisustvo pojedinačnih bakterija i virusa. Smradovi se mogu izgubiti u krvi nakon pogrešno propisanog kupanja ili neplaniranog prekida kupanja. Minimalna količina dijagnostikovana prilikom dekodiranja PLR-a je 10 klijentskih dana. Druge metode testiranja su manje;
Patogeni mikroorganizmi se otkrivaju ovisno o manifestaciji simptoma PPSS. Bolest otkrivena u ranoj fazi ne traje toliko dugo kao uznapredovali oblik;
Rezultati PLR-a bolesti će se uzeti u obzir da se brzo završi. Za dijagnosticiranje infekcija potrebno je nešto više od 4-6 godina. Zajedno sa dešifriranjem, cijeli proces traje nešto više od 1-2 dana;
U jednom trenutku, DNK materijal se ekstrahuje kako bi se izvršilo 5-6 testova. Bolesna osoba neće imati priliku da se podvrgne brisevima mnogo puta;
PLR i praćenje infekcija ne miruju, ovo područje se stalno razvija. Sa otkrićem novih test sistema sa povećanom osetljivošću, smanjuje se verovatnoća sprovođenja praćenja. Budući da je ranije bio dostupan samo stanovnicima megagradova, sada doktori bolničkih klinika u regijama ne mogu zamisliti liječenje bolesti bez njega.

Karakteristike PLR metode:

Preciznost (korekcije su minimalne i njihova učestalost ne prelazi 0,01%);
Preosjetljivost (test „broji“ pojedinačne bakterije u krvi i razmazima);
Specifičnost (PLR otkriva infekcije koje se često ne manifestiraju do važne faze);
Jedinstvenost (analiza rezultata u situacijama kada druga istraživanja ništa ne otkrivaju).

Rezultati PLR analize

Kako funkcionira Lanzugova reakcija i kako se pripremate prije analize?

Lanzugova reakcija u laboratorijskim mozgovima prenosi umnožavanje bogatih DNK i RNK dijagrama identifikacijom istog oštećenog dijela. Kiseline se pojačavaju (konjugiraju) uz pomoć enzimskih preparata. Koristeći vikorističke enzime, laboratorijski asistent uklanja dovoljno kopija patogenog DNK fragmenta da poravna PLR sa simptoma ovih i drugih bolesti izazvanih infekcijom.

U pravilu se analiziraju biološki materijali uzeti uzorkovanjem ili razmazom. Za identifikaciju (dešifrovanje polno prenosivih infekcija) uzima se bris epiderme, grlića materice ili materice na PLR. Ponekad se i vikorists tuku.

Da biste potvrdili ili otkrili prisustvo hepatitisa, toksoplazmoze ili HIV-a, uzmite krv iz vene. Krv uzeta iz prsta često daje negativne rezultate na mlijeko. Mononukleoza se dijagnosticira nakon prikupljanja materijala iz grla mazge. Tuberkuloza se može otkriti nakon sakupljanja sputuma, što se jasno vidi kod pacijenata sa ranama.

Bris materice i grlića materice na PLR je jednostavna analiza, s tim se nema zezanja. 2-3 dana prije događaja bićete ohrabreni da živite formalnim životom. Danas se gelovi i mlijeko na prirodnoj bazi koriste za posebnu higijenu. Možete piti toplu vodu sa česme. Prestanite sa pranjem - veče pre rane u laboratoriju ili ordinaciju.

Važno je i liječenje drozda uz pomoć krema, masti, čepića i sprejeva, koje se provodi. Bris se uzima na prvoj karlici nakon ili odmah nakon menstruacije. Da biste dobili tačne rezultate, preporučuje se da ne idete u toalet 2-3 godine prije uzimanja PLR brisa.

Kod osoba koje imaju Lanziugovu reakciju uzima se bris iz uretre. Biološki materijal se sakuplja sterilnom sondom ili pamučnim štapićem, koji se unosi u sjeme. Tokom jednog sata zahvata možete osjetiti blagu nelagodu ili oticanje jetre. Ljudi također moraju provesti dosta vremena učeći o seksu i higijeni. Propisuje se period prije analize, liječenje antibioticima i drugim lijekovima. Ako tegobe ne prestanu nakon uzimanja, preporučuje se što prije otići u kliniku.

Prihvatljivo je da se pacijent podvrgne analizi krvi ili da se uzme bris iz organa pacijenta. Genetski materijal se stavlja u PLR uređaj za amplifikaciju i tu se dodaju enzimi. DNK se zagrijava na 90-95 °C dok se užad ne formira u ražanj. Ovaj proces se naziva denaturacija. Za sat vremena rada reaktora, iz jednog uzorka DNK i RNK kreiraju se hiljade kopija za analizu (dešifrovanje reakcije).

Rezultati dijagnostike PLR

Lanzugova reakcija pokazuje težinu infekcije, a tačnije broj očiglednih komplikacija. Razotkrivanje preostalih stijena je individualno uvođenje mutacijskih gena u ljudsku DNK kako bi se otkrila sposobnost promjene genotipa.

Šta otkriva dijagnoza PPR infekcije?

Kvalificiranom liječniku jasno je vidljivo dekodiranje rezultata analize. Snaga Lanczygove reakcije nam omogućava da potvrdimo ili otkrijemo prisustvo takvih bolesti:

Kao što je jasno iz ove liste, PLR dijagnostika pruža lekarima širok spektar visoko specijalizovanih specijalnosti bez ograničenih mogućnosti. Metoda se može koristiti u pulmologiji, virologiji, infektivnim bolestima, onkologiji, gastroenterologiji, hematologiji, ginekologiji i urologiji.

PLR dešifriranje: rezultati

Analize Lancugove reakcije liječnici procjenjuju pojedinačno za kožne pacijente s očiglednim patologijama i kroničnim bolestima. Rezultati PLR analiza ukazuju, kao što je već rečeno, na specifične karakteristike patogenih bakterija. Dok se bavi njima, doktor određuje stadijum težine i stadijum bolesti. Na osnovu ovih pokazatelja dalje se indicira doziranje lijekova i trajanje liječenja.

Negativan PLR rezultat znači da prikupljeni biološki materijal svakodnevno pokazuje viruse ili infekcije. Pozitivan PLR je signal prije alarma. Također, otkrivena je infekcija u krvi i drugim biološkim područjima pacijenta.

Ako su vrijednosti minimalne, može se govoriti o jednostavnoj prisutnosti bolesti, a ne samo o aktivnom razvoju bolesti. Jednostavan nosilac infekcije, koji se manifestuje samo PPR, ali ne pokazuje uobičajene druge simptome, mora se stalno konsultovati sa lekarom.

Važno je ne paničariti i zapamtiti da se većina virusa poznatih nauci može liječiti antibakterijskim lijekovima. Njihov odabir i zamjena jednog sa jednim u slučaju neefikasnosti može lišiti kvalifikacije liječnika, o čemu svjedoči liječenje ove i drugih bolesti.

Dešifriranje PLR-a može se izvršiti ne samo po nahođenju liječnika, već i po nahođenju vlasti. Često se plašimo žena koje planiraju trudnoću u bliskoj budućnosti kako bismo izbjegli mogućnost polno prenosivih bolesti. Prilikom postavljanja na regionalne konsultacije sa pacijentom, nema potrebe za temeljnom dijagnozom.

PLR se propisuje za obavezne žene, koje su imale mali broj pobačaja ili pobačaja iz različitih razloga. Prije EBC-a se radi analiza kako bi se identificirali svi uzroci mogućeg izbacivanja oplođenog jajeta.

Ljudi često provode PLR nakon puštanja, tokom neke vrste praznične romanse ili vjenčanja. Dijagnostika im pomaže da ne ugroze svoje živote i zdravlje potencijalnih seksualnih partnera.

Često je PLR jedina šansa za pacijenta da se oporavi od bolesti u embrionalnoj fazi, ako je nepotreban rizik komplikovan teškim putovanjem.

Bris pomoću PLR metode za dijagnosticiranje zaraznih bolesti može postati važniji:

Direktna dijagnoza zaraznih bolesti i bolesti.

Mnoge tradicionalne metode laboratorijske dijagnostike oslanjaju se na otkrivanje svakodnevnih bolesti na različite indirektne znakove. Na primjer, ELISA dijagnostika se zasniva na proteinima otkrivenim u krvi pacijenta, koji su produkti razgradnje infektivnih agenasa, na osnovu kojih liječnik može postaviti drugu dijagnozu. Metoda PLR analize pruža direktnu indikaciju prisutnosti specifičnog uzorka DNK bolesti u materijalu uzetom od pacijenta.

Visoka specifičnost PLR dijagnostike.

Tokom procesa analize, ispitivani materijal otkriva fragment DNK koji je specifičan i ima snagu za određeni organizam – bilo bakteriju ili virus. Ovaj dio DNK je jedinstven i nije tipičan za životinjsku infekciju na zemlji.

Visoka osetljivost PLR-a.

Do infekcije može doći ako materijal uzet od pacijenta sadrži manje od jedne ćelije bakterije ili virusa. Uporedivo sa drugim imunološkim i mikrobiološkim dijagnostičkim metodama: osetljivost PLR analize – 10-100 ćelija po uzorku, ostale metode – 103-105 ćelija.

0Niz (=> Analize) Niz (=> 2) Niz (=>.html) 2

Svestranost PLR analize.

Za PLR ispitivanje moguće je koristiti praktično sve materijale koji nisu dostupni za ispitivanje drugim metodama: sluz, reznice, krv, serum, sluz, ejakulat, strugotine epitelnih ćelija - fragmenti itd. Infekcija se može javiti u bilo kojoj biološkoj materijala ili tkiva.

Postoji visok stepen podrške za rezultate PLR analize.

Jedinstvena metoda za svu obradu materijala uzetog od pacijenta za analizu, detekciju produkta reakcije, automatizovana PLR amplifikacija omogućava novu PLR dijagnozu za 4-5 godina. Istovremeno, mnogo više od sat vremena se troši na kulturne metode posmatranja - od više dana do više dana, jer je potrebno vidjeti, a zatim razviti patogen na ćelijskoj kulturi.

Mogućnost dijagnosticiranja bilo koje vrste infekcije.

Visoka osjetljivost PLR metode omogućava dijagnosticiranje infekcije ne samo u akutnoj fazi bolesti, već i otkrivanje kroničnih infekcija i identifikaciju pojedinačnih bakterija i virusa.

Bris PLR metodom omogućava otkrivanje infekcija koje se ne mogu otkriti brisom flore: klamidija, ureaplazmoza, mikoplazmoza, genitalni herpes.

Koje su značajne prednosti metode istraživanja i PLR dijagnostike? Nedostaci PLR dijagnostike uključuju:

Mogućnost postizanja pozitivnog rezultata

PLR analiza može pokazati pozitivan rezultat ako je infekcija već mrtva, "ubijena" antibioticima, a mrtve ćelije se još uvijek nalaze u tkivima pacijenta. Kako je to moguće? Vrlo jednostavno. Na primjer, infekcija živi u tkivima epitela (na mukoznoj membrani organa ili očiju). Oboje su uživali. Potrebno je sat vremena da se "obnovi" epitel ćelija. Ako liječnik odnese materijal prije nego što se ćelije potpuno obnove, materijal može sadržavati mrtve stanice infekcije. Klitini, očito, uklanja genetski materijal - DNK ili RNK tijela, što PLR misli. PLR ne odvaja mrtve ćelije od živih: traži DNK i "klonira" ih u velikom broju. Rezultat takve analize je pozitivan. U stvari, istina je da smo hibridno pozitivni.

Nemogućnost PLR-a da „oporavi” mrtvu infekciju od žive otežava otkrivanje PLR-a i kontrolu efikasnosti liječenja. Glavno pravilo je, naravno, osigurati da se mrtvi viškovi infekcije potpuno eliminiraju iz tijela, što prosječna osoba preživi 4-8 godina. Stoga, nakon uzimanja preostalih tableta antibiotika, PLR metoda se može i treba koristiti za praćenje efikasnosti liječenja.

gastroenterologija dijagnostički kompleks - 5360 rubalja

TILKI IN BEREZNY ušteda - 15%

1000 rubalja Preuzimanje EKG-a iz dekodiranja

- 25%primarni
vidjeti doktora
terapeut vikendom

980 rub. prvi pregled kod hirudoterapeuta

termin kod terapeuta - 1130 rubalja (naizmenično 1500 rubalja) „Samo tokom sedmice, subotom i sedmicama, pregled terapeuta sa 25% popusta - 1130 rubalja, umjesto 1500 rubalja (dijagnostičke procedure se plaćaju prema cjenovniku)

U kasnijoj fazi, kontrola zabrane može se obaviti drugačijim kulturnim metodom, ili setvom: samo živi mikroorganizmi koji se razmnožavaju mogu poslužiti kao znak nenasilja.

Nije preporučljivo koristiti PLR analizu za dijagnosticiranje gardnereloze, jer gardnereli - oboljeli od ove bolesti, u malom broju slučajeva, normalno žive u tlu. DNK ovih bakterija sa vikorističkim PLR će uskoro biti izgubljena. Gardnerella se ne pojavljuje u brisu, a bakterioskopija je u ovom slučaju dovoljna metoda za dijagnosticiranje gardnerele i praćenje liječenja.
Raznolikost mikroorganizama

Svaki mikrob se može promijeniti, a u isto vrijeme i DNK. Najljepša guza od ovog galusa je virus gripe. Nakon što je jednom oboljela, osoba razvije antitijela protiv virusa. Čisto teoretski, ako smo se samo jednom razboljeli od gripe, onda isto kao i od gripe, nismo mi krivi što ćemo se ponovo razboljeti. Skoro da imamo bol u grlu. Šta je razlog? Virus „mutira“, blago „mijenja“ svoj genom, a naš imuni sistem, naša antitijela više ne „prepoznaju“ starog gosta u novom izgledu. Nije ludo da se ponovo razbolim od gripe...

Prilikom dizajniranja pojačivača (PLR test sistema), odabire se fragment DNK specifičan za dati mikroorganizam koji je najmanje podložan promjenama. On je "odabran" iz takozvanog visoko konzervativnog dijela DNK. Alternativno, obilje mikroorganizama može dovesti do toga da određeni genotipovi ili sojevi posmatranog organizma mogu uzrokovati mutacije u genomu, koji se umnožava (klonira) i tako postaje neuhvatljiv zadat test sistemom.

Dakle, različiti testni sistemi su jedan od razloga zašto analize obavljene u različitim laboratorijama i u različitim klinikama pomoću iste PLR metode mogu pokazati dijametralno različite rezultate. Kako bi se što više izbjegle mutacije, sada su razvijeni standardi koji regulišu testiranje (uključujući testiranje unakrsnih reakcija, kao i ispitivanje indiciranih sojeva u domaćinstvu), za koje je potreban sistem testiranja, prva stvar koja se izlazi na tržište i Hoće li se Vicoristan koristiti za dijagnosticiranje vašeg zdravlja?Zašto dobre klinike i laboratorije koriste Vicoristan za preostale generacije test sistema. A naš medicinski centar “Euromedprestige” jedan je od rijetkih koji svojim klijentima može pružiti jasnu dijagnostiku.