पीसीआर विधि का उपयोग करके पीसीआर डायग्नोस्टिक्स विश्लेषण कैसे करें। जांच की उच्च संवेदनशीलता

पीएलआर (पोलीमरेज़ लैंज़ग प्रतिक्रिया) आणविक जीव विज्ञान की एक उपलब्धि है, जो 20वीं सदी के अंत और 21वीं सदी की शुरुआत में नैदानिक ​​​​प्रयोगशाला निदान के मुख्य तरीकों में से एक है, जो चिकित्सा विज्ञान के विभिन्न रोगियों को बहुत नुकसान पहुंचाती है।

इस तरह, जैसे कि मानव शरीर की लाखों कोशिकाओं के बीच में, जीवित वायरस ही नष्ट नहीं होता है, बल्कि उसके डीएनए का केवल एक हिस्सा होता है, तो पीएलआर, क्योंकि इसे परेशान नहीं किया जा सकता है, कोशिश कर सकता है "एलियन" की उपस्थिति के बारे में सकारात्मक परिणाम बताएं। पीएलआर का सार इसका मुख्य लाभ है।

हाइडनोस्टी और कमियाँ

पीएलआर डायग्नोस्टिक्स करने वाली प्रयोगशाला को परीक्षण प्रणालियों की उपलब्धता और चिकित्सा कर्मियों की योग्यता की अत्यधिक आवश्यकता होती है। यह एक उच्च तकनीक प्रयोगशाला है जिसमें अत्यधिक संवेदनशील और अत्यधिक विशिष्ट अभिकर्मकों का एक सुव्यवस्थित शस्त्रागार है, इसलिए कोई विशेष कमी नहीं है। कुछ भी जो नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों की अनुपस्थिति में सकारात्मक परिणाम दिखाता है और इस प्रकार डॉक्टर को दुविधा में डालता है: क्या हमें उपचार शुरू करना चाहिए या नहीं?

रोगी की देखभाल करने वाले डॉक्टर को परीक्षण के परिणामों की विश्वसनीयता पर संदेह होने लगता है, जब तक कि बीमारी के कोई लक्षण न हों। हालाँकि, पीएलआर प्रणाली की उच्च संवेदनशीलता इस स्मृति पर आधारित है कि यह प्री-क्लिनिकल चरण में एक वेक-अप कॉल प्रकट करती है, और इस मामले में सकारात्मक परिणाम एक वर्ष से भी पहले होता है, लंबे शॉट से नहीं। इसके आधार पर, डॉक्टर "पक्ष" और "विरुद्ध" अन्य तर्कों को ध्यान में रखते हुए, चिकित्सा की उपयोगिता के बारे में अपने निर्णय लेने के लिए जिम्मेदार है।

पोलीमरेज़ लैंज़ियुग प्रतिक्रिया का उपयोग करके निदान के लाभ स्पष्ट हैं:

• उच्च विशिष्टता, जो 100% तक पहुंचता है, नमूने में न्यूक्लिक एसिड के कणों की उपस्थिति के कारण होता है जो किसी विशेष जीव में शक्तिशाली होते हैं, या मनुष्यों के लिए विदेशी होते हैं;
• उच्च उत्पादकता, और यहां तक ​​कि पीएलआर एक उच्च तकनीक वाली स्वचालित तकनीक है जो सामग्री संग्रह के दिन परीक्षण करना और किसी भी चिंता के मामले में रोगी का नियमित इलाज करना संभव बनाती है;
• पीएलआर, एक ब्रेकडाउन पर काम करते हुए, जांच की एक श्रृंखला को अंजाम दे सकता है कई छुट्टियों का खुलासा करेंमानो वह कोई खजाना होगी. उदाहरण के लिए, क्लैमाइडियल संक्रमण का निदान करते समय, जब क्लैमाइडिया के लिए पीएलआर को मुख्य तरीकों पर लागू किया जाता है, तो कोई नीसर (गोनोकोकस) - एक अलार्मिस्ट का पता लगा सकता है। इसके अलावा, परिणामों की विश्वसनीयता पर कोई नकारात्मक प्रभाव नहीं पड़ता है;
• पीएलआर विधि का उपयोग कर परीक्षण ऊष्मायन अवधि के दौरान असुरक्षित सूक्ष्मजीवों का पता चलता हैयदि रोग अभी तक शरीर के अंत तक नहीं पहुंचा है, तो शीघ्र निदान रोग प्रक्रिया के भविष्य के विकास का अनुमान लगाता है, जिससे कुछ नई तैयारी करना और उसे संपूर्ण रूप से स्वीकार करना संभव हो जाता है।

इसके अलावा, निदान के दौरान कभी-कभी उत्पन्न होने वाले भ्रम को खत्म करने के लिए, पीएलआर खुद को इस तथ्य से भी बचाता है कि इसके परिणामों को आवश्यक उद्देश्यों के लिए विशेषज्ञ में उन्हें सही करने की विधि का उपयोग करके रिकॉर्ड किया जा सकता है (फोटोग्राफी, कंप्यूटर)।

पीएलआर प्रकारों में मानक नकारात्मक परिणामों को महत्व देना है, जो विदेशी न्यूक्लिक एसिड के टुकड़ों की उपस्थिति को इंगित करता है, एक सकारात्मक साक्ष्य शरीर में संक्रमण की उपस्थिति को इंगित करता है, डिजिटल मान परीक्षण के समय वायरस की ताकत और इसकी एकाग्रता को इंगित करता है। प्रोटीओ ने इस डॉक्टर के विश्लेषण को बाहरी रूप से समझा, जिसने "पीएलआर" विषय पर एक विशेष अध्ययन किया है। अपने आप परिणामों की व्याख्या करने का प्रयास करने का कोई मतलब नहीं है, क्योंकि जैसे ही सब कुछ होता है, आप गलत समझ सकते हैं और घमंड करना शुरू कर सकते हैं।

पीएलआर किससे डरता है, यह क्या कर सकता है और हम इसके लिए कैसे तैयारी कर सकते हैं?

किसी भी अन्य जांच की तरह, कभी-कभी परीक्षण के परिणाम या तो सकारात्मक या नकारात्मक होते हैं, डी पीएलआर को दोष नहीं देना है। इस तरह की स्थितियों में निम्नलिखित घटित हो सकता है:

1. प्रतिक्रिया के चरणों में से एक तक तकनीकी प्रक्रिया का विघटन;
2. सामग्री के संग्रह, उसके संरक्षण और परिवहन के लिए नेडोट्रिमन्न्या नियम;
3. सामग्री में तृतीय-पक्ष तत्वों की उपस्थिति.

कहने का तात्पर्य यह है कि, पीएलआर - संक्रमण के निदान से पहले, इसे सम्मानपूर्वक, सावधानीपूर्वक और सटीक रूप से करना आवश्यक है, अन्यथा सामग्री अपनी संरचना बदल सकती है या पूरी तरह से नष्ट हो सकती है।

पीएलआर निदान के चरण। जांच के किसी भी चरण में मिल्कोव के नतीजे बाधित हो सकते हैं।

संक्रमणों का पीएलआर निदान अन्य प्रयोगशाला विधियों के बीच "स्वर्ण मानकों" की श्रेणी में आता है, इसलिए उनका उपयोग रोजमर्रा की बीमारियों का पता लगाने के लिए किया जा सकता है, जो पहली नज़र में मेरे लिए कुछ भी गंभीर संकेत नहीं देते हैं:

• विभिन्न स्थानीयकरणों का क्षय रोग, निमोनिया (क्लैमाइडिया के कारण होने वाले असामान्य निमोनिया सहित);
• बचपन में संक्रमण (गाय रूबेला, कण्ठमाला, चिरप);
• डिप्थीरिया;
• साल्मोनेला;
• ज़ूनोटिक संक्रामक रोग - लिस्टेरियोसिस (लिम्फ नोड्स, केंद्रीय तंत्रिका तंत्र, आंतरिक अंगों को नुकसान के कारण बीमारी विभिन्न लक्षणों की विशेषता है);
• एपस्टीन-बार वायरस (संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस, आदि) के कारण होने वाली बीमारी;
• ऑन्कोलॉजिकल पैथोलॉजी, पैपिलोमावायरस संक्रमण (इस प्रकार की आईडीपी) द्वारा उकसाया गया;
• बोरेलियोसिस (लाइम रोग, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस);
• हेलिकोबैक्टर पाइलोरी संक्रमण, सूक्ष्म जीव हेलिकोबैक्टर पाइलोरी के कारण होता है, जो किसी व्यक्ति की योनि में रहता है। यह सिद्ध हो चुका है कि हेलिकोबैक्टर पाइलोरी स्कूटम या 12-डिजिट कोलन के कैंसर के विकास का कारण बनता है;
• और व्यावहारिक रूप से सब कुछ।

बीमारी से फैलने वाले संक्रमणों का पीएलआर-निदान विशेष रूप से महत्वपूर्ण होता है जब इस तरह से होने वाली बीमारियाँ अक्सर बिना किसी नैदानिक ​​​​अभिव्यक्ति के लंबे समय तक चली जाती हैं, लेकिन फिर बीमार होने पर सक्रिय होने लगती हैं और इस तरह से, स्वास्थ्य को खतरे में डालें और बच्चे के जीवन को नुकसान पहुँचाएँ। इसी प्रकार i का प्रयोग करें। उनसे कार्रवाई ("मशाल") तुरंत और ІПШ तक स्थापित की जाती है, फिर बाकी को रिपोर्ट पर विचार करने की आवश्यकता होती है। आप लेख के निम्नलिखित अनुभागों में सबसे लोकप्रिय तरीकों के बारे में अधिक जान सकते हैं।

विश्वसनीय परिणाम पाने के लिए सही ढंग से तैयारी कैसे करें?

यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि पीएलआर की तैयारी सरल है और इसमें रोगी की ओर से कोई विशेष प्रयास शामिल नहीं है। तीन अजीब कार्यों पर हस्ताक्षर करना आवश्यक है:

1. विश्लेषण की तारीख से 24 साल पहले लेख से संपर्क न करें;
2. शिरा से रक्त एकत्र करने और उसका विश्लेषण करने के लिए, आपको उपवास नाव पर आना होगा, लेकिन आप तब तक नहीं पी सकते जब तक आप बोल न लें;
3. जितनी जल्दी हो सके इसे मुझे दे दो (एक बाँझ जार में, फार्मेसी के सामने रख दिया गया)।

पीएलआर का उपयोग किसी भी जैविक वातावरण में किया जा सकता है

पीएलआर विधि "रक्तप्यास" में हस्तक्षेप नहीं करती है; यह संक्रामक एजेंटों के संचरण को रोकने के लिए एक जैविक माध्यम का उपयोग करती है। चयन करें - आगे की जांच के लिए क्या लेना होगा, डॉक्टर के पास भेजा जाएगा।

इस तरीके से, अलार्म की तलाश में, रक्त विश्लेषण के अलावा (हालांकि हम संपर्क भी कर सकते हैं और, ज्यादातर मामलों में, अन्य सामग्री के समानांतर आगे बढ़ सकते हैं), आप विकोराइज़ कर सकते हैं:

• (मूत्रजनन पथ की दृष्टि);
• मुंह, कंजंक्टिवा, नासोफरीनक्स और धमनियों की श्लेष्मा झिल्ली का एक टुकड़ा (महिलाओं के लिए, गर्भाशय ग्रीवा और मांसपेशियों से, पुरुषों के लिए, मूत्रमार्ग से);
• स्लिनु;
• शुक्राणु;
• सामने की बेल से;
• अपरा ऊतक और एमनियोटिक द्रव (एमनियोटिक द्रव);
• अवसादन (सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद), उदाहरण के लिए, आईपीएसएस और माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस के प्रकारों की पहचान करने के लिए;
• इसी पदार्थ के साथ थूक और फुफ्फुस द्रव;
• exudati;
• यदि केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के संक्रामक घाव का संदेह हो तो रीढ़ की हड्डी;
• बायोप्सी सामग्री (बायोप्टाट), यकृत, 12-पंजे वाली आंत, स्कूट आदि से ली गई।

उपरोक्त उल्लिखित से पहले, मैं यह जोड़ना चाहूंगा कि सभी मामलों में परीक्षण के लिए सामग्री, स्क्रैपिंग और अवलोकन में, पर्याप्त होगी, पीएलआर विधि द्वारा कुछ परीक्षण के लिए अधिक प्रयास की आवश्यकता नहीं होती है, विश्लेषण सीमित है कई माइक्रोलीटर को एपेंडॉर्फ-प्रकार के माइक्रोट्यूब से लिया जाना चाहिए और विवचेनिया को भेजा जाना चाहिए।

बीमारी और ठहराव पीएलआर

वीआईएल और पोलीमरेज़ लैंज़ग प्रतिक्रिया

यदि आप गुमनाम परीक्षण से गुजरते हैं और परिणाम सकारात्मक आते हैं, तो इम्युनोब्लॉटिंग डायग्नोस्टिक्स को दोबारा दोहराया जाना चाहिए। एक बार निदान की पुष्टि हो जाने पर, रोगी को अतिरिक्त जाँचें निर्धारित की जाती हैं:

1. लिम्फोसाइट्स सीडी 4 (प्रतिरक्षा सक्षम कोशिकाएं - टी-हेल्पर्स या किडनी कोशिकाएं) की संख्या के पूर्ण मूल्यों की अतिरिक्त प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रियाओं के आधार पर, संक्रमण पहले हम पर हमला करता है, जिसके बाद वे अपना खर्च करते हैं और मुख्य अधिकारी नष्ट नहीं कर सकते हैं। उनका अपना” और किसी और का।” रक्त प्लाज्मा में घूमने वाले आरएनए वायरस को गलती से शरीर में सामान्य कोशिकाएं समझ लिया जाता है और उन पर प्रतिक्रिया नहीं करता है;
2. पीएलआर विधि द्वारा आरएनए वायरस का पता लगाना और चरण के आधार पर वायरल कणों की सांद्रता का वितरण, रोग प्रक्रिया की गंभीरता और इन आंकड़ों के संतुलन के आधार पर पूर्वानुमान. जाहिर है, योजना में "आदर्श" शब्द गायब है, इसलिए प्रतिक्रिया हमेशा सकारात्मक होती है, और डिजिटल मूल्यों को समझना डॉक्टर की क्षमता के अंतर्गत आता है।

पीएलआर और हेपेटाइटिस

पीएलआर विधि हेपेटाइटिस का पता लगा सकती है, अक्सर परीक्षण का उपयोग हेपेटाइटिस का निदान करने के लिए किया जाता है, जिसका अन्य तरीकों से खराब निदान किया जाता है।

हेपेटाइटिस सी वायरस (आरएनए) मानव शरीर में इसके व्यवहार के लिए जिम्मेदार है। यकृत कोशिकाओं (हेपेटोसाइट्स) के जीनोम में फंसकर, वह सही समय पर वहां रहता है, जो 2 साल या 20 साल में आ सकता है, इसलिए डॉक्टरों ने उसे "मृत हत्यारा" उपनाम दिया। हेपेटाइटिस सी से लीवर पैरेन्काइमा में एक घातक प्रक्रिया का विकास होता है, जो बाद के चरणों में प्रकट होता है। प्रतिरक्षा प्रणाली वायरस को हेपेटोसाइट समझकर यह सब चिह्नित नहीं करती है। हालाँकि, कई मामलों में वायरस के प्रति एंटीबॉडी उत्पन्न होती हैं, और वे स्वस्थ प्रतिरक्षा प्रणाली की रक्षा नहीं करते हैं। हेपेटाइटिस सी के लिए एलिसा का निदान करने के लिए, यह बहुत जानकारीपूर्ण नहीं है, क्योंकि यह इंगित करता है कि वायरस ने निशान खो दिए हैं, और यह स्वयं संक्रमित है या नहीं यह अज्ञात है। एचसीवी संक्रमण के मामलों में, स्वयं-विलुप्ति होती है, क्योंकि वायरस के खिलाफ एंटीबॉडी नष्ट हो जाती हैं और हमेशा के लिए प्रसारित होती रहती हैं (इम्यूनोलॉजिकल मेमोरी)। पीएलआर एंटीबॉडी के निर्माण से काफी पहले होता है और 1-1.5 दिनों के भीतर एक वायरल कण का पता लगा सकता है, जबकि एटी डिलीवरी से 2 महीने पहले के अंतराल पर दिखाई दे सकता है।

ऐसे मामलों में जहां हेपेटाइटिस सी वायरस के मानव शरीर में फैलने का संदेह है, पीएलआर डायग्नोस्टिक्स जांच का सबसे इष्टतम तरीका है, क्योंकि केवल रोगी के रक्त या यकृत बायोप्सी में "कानूनी दुश्मन" की उपस्थिति को पहचानना संभव है। .

हालाँकि, कभी-कभी एटी सकारात्मक होने और पीएलआर परिणाम नकारात्मक होने पर दौरा पड़ सकता है। इस पद्धति का उपयोग तब किया जाता है जब वायरस की तीव्रता बहुत कम होती है या जब यह रक्तप्रवाह में प्रवेश किए बिना "निष्क्रिय" रूप से यकृत में प्रवेश करता है। सच्चाई जानने के लिए रोगी से दोबारा या एक से अधिक बार विश्लेषण लिया जाता है।

पैपिलोमावायरस संक्रमण

चूँकि स्वयं-संक्रमण होना असंभव है, यह भी संभव है, बिना कुछ बताए, शासक के शरीर में लंबे समय तक बना रहना, जिसकी कीमत के बारे में मुझे संदेह नहीं है, क्योंकि पीएलआर टुकड़े नहीं थे विकसित हुआ, और बीमारी के लक्षण प्रतिदिन थे। हालाँकि, पेपिलोमावायरस संक्रमण की उपस्थिति, चाहे वह अव्यक्त हो या अव्यक्त, किसी व्यक्ति के स्वास्थ्य के लिए बहुत अच्छी नहीं है, और कैंसर का कारण बनने वाले वायरस के प्रकार (प्रकार 16, 18) को ले जाना विशेष रूप से खतरनाक है।

अक्सर, आधी आबादी आईडीपी से पीड़ित होती है, क्योंकि वायरस महिला गर्भाशय ग्रीवा और विशेष रूप से गर्भाशय ग्रीवा को प्रभावित करने की अधिक संभावना रखता है, जहां विभिन्न प्रकार के वायरस डिसप्लास्टिक प्रक्रियाओं के विकास का कारण बनते हैं, और फिर गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर, डिसप्लेसिया का इलाज करते हैं और देते हैं। वायरस को खुली छूट. तो अक्ष, पोलीमरेज़ लैंज़ग प्रतिक्रिया से वायरल डीएनए का पता चलता है, और फिर या तो "खराब" या "अच्छा" (ऑन्कोजेनिक या गैर-ऑन्कोजेनिक) प्रकार महिला के शरीर में बस जाता है।

अन्य आईपीएसएस और टॉर्च संक्रमण

जाहिर है, पोलीमरेज़ लैंज़ग प्रतिक्रिया न्यूक्लिक एसिड से बनने वाली किसी भी विदेशी संरचना का पता लगा सकती है, इसलिए परीक्षण सभी एसपीएस और टीओआरसीएच संक्रमणों की पहचान करने के लिए उपयुक्त है, जिनका हमेशा पता नहीं चलता है। क्या गोनोकोकस की पहचान के लिए इतनी महंगी जांच करना संभव है, जो उपलब्ध और सस्ती हैं?

टॉर्च संक्रमण और आईपीएसएस आपस में जुड़े हुए हैं, इसलिए यह निर्धारित करना महत्वपूर्ण है कि किस समूह को एक दूसरे को सौंपा जाना चाहिए। उनके लिए बड़ा होना मुश्किल हो सकता है, क्योंकि उनमें सूक्ष्मजीवों के विभिन्न समूह हो सकते हैं जो राज्य विधियों द्वारा या तो युवा लोगों (इम्यूनोडेफिशिएंसी) के लिए प्रसारित हो सकते हैं, और कम दिलचस्प अस्थिरता बन सकते हैं, जिससे गर्भावस्था और गर्भावस्था के दौरान संभावित नकारात्मक प्रवाह हो सकता है।

पीएलआर अधिग्रहीत संक्रमणों का पता लगाने की मुख्य विधि है

नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियों का विकास विभिन्न कारकों पर आधारित है, जो केवल पीएलआर की शक्ति से निर्धारित होते हैं, जो एलिसा और एलिसा दोनों के साथ मुख्य कार्य हैं। विशेष रूप से बीमारी के लक्षणों के लिए एकल पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में।ऐसी कठिन स्थिति एक पॉलीमाइक्रोबियल संक्रमण के कारण हो सकती है, जिसमें स्पष्ट बीमारियों के अलावा, मानसिक रोगजनक भी शामिल हैं।

यूरियाप्लाज्मा अक्सर माइकोप्लाज्मा वाले जोड़ों में देखा जाता है।यह व्यर्थ नहीं है। क्लैमाइडिया जैसी ये प्रजातियां न तो वायरस हैं और न ही बैक्टीरिया, वे कोशिकाओं के बीच में रहती हैं और आईपीएसएस से जुड़ी हो सकती हैं, हालांकि स्वस्थ शरीर में उनकी उपस्थिति भी असामान्य नहीं है। इसलिए, किसी बीमार व्यक्ति की स्वस्थ नाक बनाने के लिए विशेष तरीकों की आवश्यकता होती है, जहां पीएलआर को सबसे विश्वसनीय माना जाता है, इन सूक्ष्मजीवों के विशिष्ट व्यवहार के आधार पर जांच अप्रभावी पाई जाती है।

मामला क्या है (टाइप 1, 2) और जिसका संबंध हर्पीसवायरस (टाइप 5) से भी है, तो यहां स्थिति अस्पष्ट है। पृथ्वी की आबादी की संक्रमण दर 100% के करीब पहुंच रही है, इसलिए इस अवधि में वायरस और उसकी खुराक की पहचान करना बहुत महत्वपूर्ण है, जो विशेष रूप से विषैलेपन में भूमिका निभाता है, यहां तक ​​​​कि वयस्क लोगों में भी वायरस जीवित रहता है आपके शरीर में सब कुछ अक्सर इससे प्यास नहीं लगती और बीमारी का संकेत नहीं मिलता।

इसलिए, आपको ऐसी स्थिति के लिए डॉक्टर के नुस्खे को नजरअंदाज नहीं करना चाहिए, और यहां तक ​​​​कि कुछ मामलों में, पोलीमरेज़ लैंज़ग प्रतिक्रिया प्रयोगशाला निदान की एक अनिवार्य और आवश्यक विधि है, जो न केवल महिलाओं कू, आह, छोटे मानव में गंभीर जटिलताओं से बचा सकती है। वह जो अभी तक पैदा नहीं हुआ है।

हम यह समझना चाहेंगे कि पीएलआर जैसी चमत्कारी पद्धति 30 वर्षों से अधिक समय से मानवता की सेवा कर रही है। यह परीक्षण करते समय, किसी को संक्रामक रोगों के जोखिम तक सीमित नहीं रहना चाहिए। आणविक जीव विज्ञान के क्षेत्र में लोकप्रिय पोलीमरेज़ लैंज़ग प्रतिक्रिया, आनुवंशिकी के साथ अटूट रूप से जुड़ी हुई है। किसी विशेष व्यक्ति की पहचान करने के लिए एक आपराधिक अन्वेषक से सफलतापूर्वक संपर्क करता है, पशु चिकित्सा की स्थापना के लिए जहाज चिकित्सा में, पशु चिकित्सा में, जानवरों के लिए एक क्लिनिक के रूप में सड़क पर संपत्ति खरीद सकते हैं, साथ ही अन्य क्षेत्रों (उद्योग, ग्रामीण सरकार, आदि) में भी।

वीडियो: पीएलआर - उस ठहराव का सार

किसी अन्य गतिविधि के लिए बैक्टीरिया की जानकारी की आनुवंशिकी।

पोलीमरेज़ लैंज़ग प्रतिक्रिया

पोलीमरेज़ लैंज़ग प्रतिक्रिया एक ऐसी विधि है जो विश्लेषण किए जा रहे नमूने (जैविक सामग्री या शुद्ध संस्कृति सहित) में कई डीएनए अणुओं की बड़ी वृद्धि (प्रवर्धन) की अनुमति देती है।

सूक्ष्म जीव विज्ञान में एक निदान पद्धति के रूप में पीएलआर का मुख्य लाभ बहुत उच्च संवेदनशीलता है, जो नमूनों में रोगजनकों की बेहद कम सांद्रता का पता लगाने की अनुमति देता है, साथ ही विनियमित विशिष्टता, जो सामान्य, प्रजाति या उप-विशिष्ट पर जीवों की पहचान करने की अनुमति देता है। स्तर। पीएलआर का मुख्य भाग इसकी उच्च संवेदनशीलता के कारण है - नमूने आसानी से सकारात्मक नियंत्रण, या पीएलआर उत्पाद से डीएनए को दूषित कर सकते हैं, जिससे नकारात्मक-सकारात्मक प्रतिक्रिया हो सकती है। यह उन दिमागों पर गंभीर प्रतिबंध लगाता है जिनमें पीएलआर का मिश्रण और तैयार पीएलआर उत्पादों के साथ काम किया जाता है।

पीएलआर का संचालन किया।निम्नलिखित घटकों को मिलाने के लिए एक प्रतिक्रिया मिश्रण तैयार किया जा रहा है:

मैंने खोजे गए नमूने से डीएनए देखा,

बुफ़रनी रोज़चिन

Mg2+ आयन (एंजाइम के लिए आवश्यक),

दो प्राइमर एकल-फंसे हुए छोटे डीएनए अणु होते हैं (अक्सर 18 से 24 न्यूक्लियोटाइड लंबे होते हैं), जो अलग-अलग डीएनए अनुक्रमों के सिरों के पूरक होते हैं जिनका पता लगाया जाता है।

सुमिश डीऑक्सीन्यूक्लियोटाइड ट्राइफॉस्फेट।

गर्मी-प्रतिरोधी डीएनए पोलीमरेज़ (अक्सर विकोराइज़्ड टैक पोलीमरेज़ - पोलीमरेज़ देखा जाता है थर्मस जलीय).

फिर इस प्रतिक्रिया को एक एम्पलीफायर में रखा जा सकता है, जो वास्तव में थर्मोस्टेट द्वारा प्रोग्राम किया जाता है। एम्प्लीफायर में तापमान परिवर्तन के 30-40 चक्र किये जाते हैं। इन चक्रों से त्वचा में तीन चरण होते हैं (विभाजन चित्र 1):

विकृतीकरण (तापमान 94°W) - पानी के लेंस फट जाते हैं, और डीएनए लेंस अलग हो जाते हैं।

प्राइमर गिर गए हैं (तापमान लगभग 50-60 डिग्री सेल्सियस है) - प्राइमर को डीएनए अनुक्रम के अंत में जोड़ा जाता है। सामान्य तौर पर, कम तापमान पर, ट्रेस किए गए टुकड़े (पुनर्जन्म) से डीएनए आउटपुट की वृद्धि ऊर्जावान रूप से अधिक कुशल होती है, क्योंकि प्रतिक्रिया मिश्रण में प्राइमर की सांद्रता अनुक्रम में डीएनए की सांद्रता से कई गुना अधिक होती है (के लिए) उदाहरण के लिए, पीएलआर के कोब चक्रों में), इसलिए प्राइमरों की प्रतिक्रिया डीएनए के माध्यम से आगे बढ़ती है। पिघलने का तापमान प्राइमरों के पिघलने (विकृतीकरण) तापमान के आधार पर चुना जाता है।

बढ़ाव (तापमान 72 डिग्री सेल्सियस है) - डीएनए पोलीमरेज़ लंबे डीएनए मैट्रिक्स के प्राइमर का उत्पादन करता है। तापमान विकोराइज्ड डीएनए पोलीमरेज़ के उत्पादन के लिए इष्टतम तापमान को इंगित करता है।

परिणामों का पता लगाना पीएलआर के विभिन्न संस्करणों में भिन्न होता है और इसका वर्णन "पीएलआर के प्रकार" अनुभाग में किया गया है।

पीएलआर की गतिशीलता

प्रारंभिक पीएलआर चक्रों में, कई दोहरे डीएनए अणु, जिनका आकार प्राइमर लैंडिंग साइटों के बीच की स्थिति से निर्धारित होता है, त्वचा चक्र के साथ बातचीत करते हैं। इस तरह, मौजूदा डीएनए अणुओं की एक छोटी संख्या बनाई जाती है जिन्हें निकाला जा सकता है (div. चित्र 2)।

इस प्रकार, प्रारंभिक चक्रों में, पीएलआर उत्पाद की ताकत सूत्र एम * 2 एन द्वारा वर्णित है, जहां एम नमूना डीएनए की उपज है, एन चक्रों की संख्या है। तब प्रतिक्रिया एक पठार पर पहुंच जाती है। यह प्रतिक्रिया उत्पाद के संचय, प्राइमर और डीऑक्सीन्यूक्लियोटाइड ट्राइफॉस्फेट की सांद्रता में कमी, साथ ही पायरोफॉस्फेट की सांद्रता में वृद्धि (चित्र 3) के माध्यम से होता है।

रिज़्नोविडी पीएलआर

कन्वेंशन पीएलआर

पीएलआर प्रतिक्रिया के इस संस्करण में, चक्रों की संख्या (30-40) का चयन किया जाता है, जिसके बाद यह विश्लेषण किया जाता है कि प्रतिक्रिया मिश्रण में ज्वालामुखीय डीएनए अणुओं का संचय जमा हुआ है या नहीं।

निदान पद्धति के रूप में वैरिकाज़ नसों के मामले में पीएलआर को व्यवस्थित करने का यह विकल्प एक स्पष्ट विधि है। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया छवि में पाए जाने वाले डीएनए अणुओं के निशान की उपस्थिति को इंगित करती है। इसके अस्तित्व के बारे में सूचित करने के लिए नकारात्मक प्रतिक्रिया। पठार की प्रतिक्रिया के माध्यम से आउटपुट डीएनए अणुओं का मात्रात्मक मूल्यांकन असंभव है।

उत्पाद की पहचान करने की मुख्य विधि एगरोज़ या पॉलीएक्रिलामाइड जैल पर वैद्युतकणसंचलन है। पीएलआर उत्पादों को उनके आणविक भार को कम करने के लिए एक विद्युत क्षेत्र के तहत एक जेल में अलग किया जाता है। जेल में इंटरकैलेटिंग बैरबेरी (डीएनए-लिंक्ड अवस्था में फ्लोरोसेंट - अक्सर ब्रोमाइड एथाइड) होता है। इस प्रकार, पराबैंगनी प्रकाश के संपर्क में आने पर, उस निशान की उपस्थिति या उपस्थिति का पता लगाना संभव होगा जो आवश्यक आणविक द्रव्यमान के डीएनए को इंगित करता है। नैदानिक ​​उद्देश्यों के लिए पीएलआर करने के घंटे के दौरान, प्रतिक्रिया का सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण हमेशा रखा जाता है, जिसके परिणामस्वरूप समान संकेत मिलते हैं (डिव. चित्र 4)।

वास्तविक समय में पीएलआर

पीएलआर उत्पादन के इस संस्करण में, प्रतिक्रिया मिश्रण में पीएलआर उत्पाद की ताकत प्रतिक्रिया के दौरान लगातार दर्ज की जाती है। इससे एक प्रतिक्रिया वक्र उत्पन्न करना संभव हो जाता है (div. चित्र 3) और, इससे आते हुए, कणों से कई अलग-अलग डीएनए अणुओं को निकालना संभव हो जाता है।

वास्तविक समय में किए गए पीएलआर के प्रकारों में से एक विकोरिस्टिक इंटरकेलेटिंग एजेंट का उपयोग होता है, जिसे सीधे प्रतिक्रिया मिश्रण (अक्सर विकोरिस्टिक एसवाईबीआरग्रीन) में जोड़ा जाता है। एक अन्य प्रकार फ्लोरोसेंट जांच के प्रकारों में से एक का उपयोग है जो पीएलआर उत्पाद के बीच में अंतरिक्ष से जुड़े होते हैं, जो पहचान की विशिष्टता को बढ़ाने की अनुमति देता है (div. चित्र 5)। प्रतिक्रिया के दौरान प्रतिदीप्ति का पता लगातार लगाया जाता है।

तेजी से पता लगाने की संभावना के अलावा, वास्तविक समय में पीएलआर के अन्य फायदे सम्मेलन के अनुरूप सामने आए हैं। पीएलआर का यह संस्करण सरल, तेज है और इसमें पीएलआर उत्पादों के साथ ट्यूब खोलने की भी आवश्यकता नहीं होती है, जो अन्य कणों के संदूषण को कम करता है। मुख्य नुकसान मूल की तुलना में प्रतिदीप्ति का पता लगाने की बढ़ी हुई क्षमता के कारण एम्पलीफायर का उच्च प्रदर्शन है।

डिजिटल किल्किस्ना पीएलआर

पीएलआर का एक नया, महंगा और अभी भी कम-चौड़ाई वाला संस्करण, जो किसी नमूने में डीएनए की ताकत को अधिक सटीक रूप से निर्धारित करना संभव बनाता है। इस संस्करण में, मिश्रण की प्रतिक्रिया, जिसमें फ्लोरोसेंट बार्नबेरी शामिल है, को बड़ी संख्या में सूक्ष्म मात्राओं (उदाहरण के लिए, एक इमल्शन में बूंदें) में विभाजित किया गया है। पीएलआर से गुजरने के बाद, यह विश्लेषण किया जाता है कि बूंदों के किस हिस्से में सकारात्मक प्रतिक्रिया होती है और, जाहिर है, प्रतिदीप्ति देखी जाती है। यह भाग प्रत्येक व्यक्ति में पाए जाने वाले डीएनए अणुओं की संख्या के समानुपाती होगा।

उत्क्रमण प्रतिलेखन से पीएलआर

पीएलआर के इस या किसी अन्य संस्करण से पहले, रिवर्सल एंजाइम की मदद से रिवर्सल ट्रांसक्रिप्शन (आरएनए से डीएनए) की प्रतिक्रिया बाधित होती है। इस प्रकार, यह विधि आरएनए अणुओं की सटीक पहचान की अनुमति देती है। इसका उपयोग आरएनए वायरस का पता लगाने या किसी विशेष जीन के प्रतिलेखन (एमआरएनए) के स्तर को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है।

माल्युनोक 1.एटापी पीएलआर। प्राइमर को लाल रंग से चिह्नित किया जाता है।

माल्युनोक 2.पीएलआर के दौरान प्राइमरों से घिरे दोहरे डीएनए अणुओं का संचय।

माल्युनोक 3.नमूने में पाए गए डीएनए अणुओं की विभिन्न सांद्रता पर पीएलआर प्रतिक्रिया की गतिशीलता। (ए) - उच्चतम सांद्रता (बी) - मध्यवर्ती एकाग्रता (सी) - सबसे कम एकाग्रता

माल्युनोक 4.पीएलआर उत्पादों का एगरोज़ वैद्युतकणसंचलन। K+ - सकारात्मक नियंत्रण (डीएनए की उपस्थिति के पीछे जिसका पता लगाया जा रहा है)। 1-7 - अतिरिक्त संकेत (जिनमें से 1-2 सकारात्मक हैं, 3-7 - नकारात्मक)। के-नकारात्मक नियंत्रण (वीडियो डीएनए सुकाना डीएनए)। कई मामलों में, पूरे उत्पाद के अलावा, अधिक हल्के गैर-विशिष्ट प्रतिक्रिया उत्पाद (प्राइमर डिमर) दिखाई देते हैं।

माल्युनोक 5.घंटे में विकोरिस्तानन्या पीएलआर के घंटे के तहत पता लगाने के तरीके। (ए) - इंटरकलेटेड बार्नेकल - डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए से बंधे होने पर फ्लोरोसेंस (बी) - टैकमैन जांच - फ्लोरोसेंस तब होता है जब डीएनए जांच को डीएनए पोलीमरेज़ द्वारा फ्लोरोफोर के आधार पर 5'-3' एंडोन्यूक्लिज़ गतिविधि के साथ विभाजित किया जाता है। बुझानेवाला. (सी) - मॉलिक्यूलरबीकन जांच - रिमोट फ्लोरोफोर और एक्सटिंगुइशर के स्थान के पीछे पूरे टुकड़े के साथ जांच के संकरण के दौरान प्रतिदीप्ति दिखाई देती है (डी) - लाइटसाइक्लर जांच - स्थानांतरित जांच (एफआरईटी) के संकरण के दौरान स्वीकर्ता की प्रतिदीप्ति दिखाई देती है।

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीएलआर, पीसीआर) एक जैविक वायरस से डीएनए टुकड़े (जीन) की अज्ञात प्रतियों को हटाने की एक विधि है।

आणविक जीव विज्ञान की एक विधि के रूप में पीएलआर का सार मस्तिष्क में विशेष एंजाइमों की मदद से गीत जीन (डीएनए एक्सटेंशन) की बड़े पैमाने पर नमूना प्रतिलिपि में निहित है। कृत्रिम परिवेशीय. पीएलआर की एक महत्वपूर्ण विशेषता डीएनए (जीन) के एक विशिष्ट टुकड़े की एक प्रति को हटाना है, जो किसी दिए गए दिमाग से मेल खाती है। डीएनए प्रतिलिपि की प्रक्रिया का एक पर्यायवाची शब्द "प्रवर्धन" है। डी एन ए की नकल विवो मेंआप प्रवर्धन का भी उपयोग कर सकते हैं. हालाँकि, प्रतिकृति के परिणामस्वरूप, लैंकुग पोलीमरेज़ प्रतिक्रिया के दौरान डीएनए के छोटे खंड (अधिकतम 40,000 न्यूक्लियोटाइड जोड़े) प्रवर्धित होते हैं।

मूलरूप आदर्श

इसके अलावा, पीएलआर दोहराए जाने वाले तापमान चक्रों के दौरान इन विट्रो में डीएनए टुकड़ों की कार्बोनेस प्रतिलिपि है। एक तापमान चक्र के भीतर प्रतिक्रिया प्रक्रिया कैसे होती है?

न्यूक्लियोटाइड लांस का संश्लेषण एंजाइम डीएनए पोलीमरेज़ द्वारा किया जाता है। हालाँकि, कोब को काम करने के लिए, एंजाइम को एक शुरुआती प्लेटफ़ॉर्म की आवश्यकता होती है। मैदानों की तरह, "प्राइमर" (बीज) 15-20 न्यूक्लियोटाइड तक सिंथेटिक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड के रूप में कार्य करते हैं। दो प्राइमर (आगे और पीछे) होते हैं, वे डीएनए टेम्पलेट के अनुभागों के पूरक होते हैं और प्राइमर से घिरे डीएनए टुकड़े को डीएनए पोलीमरेज़ द्वारा कॉपी किया जाता है। पोलीमरेज़ का कार्य डीएनए टेम्पलेट के अनुक्रम के पूरक न्यूक्लियोटाइड के क्रमिक जोड़ में निहित है। टिम स्वयं, एक तापमान चक्र में, फिर से दो नए डीएनए टुकड़े संश्लेषित करता है (चूंकि डीएनए अणु डोलैंट्स्युज़्कोवा है, तो दो मैट्रिक्स हैं)। इस प्रकार, 25-35 चक्रों में, नमूना प्राइमरों द्वारा पहचाने गए डीएनए प्लॉट की अरबों प्रतियां जमा करता है। एक बंद चक्र की संरचना को इस प्रकार दर्शाया जा सकता है:

1. डीएनए विकृतीकरण (डीएनए लेंस का पिघलना, विघटन) - 95°C - 1 या 2 हविलिन;
2. गिराए गए प्राइमर (प्राइमर डीएनए टेम्पलेट से जुड़ते हैं, इस चरण का तापमान प्राइमर की न्यूक्लियोटाइड संरचना द्वारा निर्धारित होता है) - 60 डिग्री सेल्सियस (उदाहरण के लिए) - 1 हविलिना;
3. डीएनए बढ़ाव (पोलीमरेज़ डीएनए को संश्लेषित करता है) - 72°C - 1 घंटा (टुकड़े के संश्लेषित होने तक एक घंटे के लिए छोड़ दें)।

प्रयोगशाला में पोलीमरेज़ लैंज़ियुग प्रतिक्रिया की विधि का परीक्षण करने का व्यावहारिक आधार इसमें शामिल होना चाहिए:

1. (या जिसे थर्मल साइक्लर भी कहा जाता है);
2. एस के लिए सिस्टम (पीएलआर परिणामों के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए);
3. सिस्टम (पीएलआर के परिणामों का विश्लेषण करने के लिए);
4. (नमूना तैयार करने के लिए);
5. सेट (मैकेनिकल और इलेक्ट्रॉनिक)।

पीएलआर प्रयोगशाला के पूर्ण कामकाज के लिए मुख्य और सहायक उपकरणों के अलावा, आवश्यक सामग्रियां भी हैं: बाँझ युक्तियाँ, ट्यूब, ट्यूब और डिस्पेंसर के लिए रैक।

एक पूर्ण पोलीमरेज़ लैंकुग प्रतिक्रिया को अंजाम देने के लिए प्राथमिक पीएलआर प्रयोगशाला में अभिकर्मक आधार में एक बफर के साथ एंजाइम डीएनए पोलीमरेज़, प्राइमर (विश्लेषण किए गए डीएनए मैट्रिक्स के मूल और अंत के पूरक छोटे सिंथेटिक डीएनए टुकड़े), न्यूक्लियोटाइड का योग शामिल है ( ए, टी, जी, सी) . शुद्ध जल भी नितांत आवश्यक है।

पीएलआर पद्धति के लाभ

जांच की उच्च संवेदनशीलता

विधि की संवेदनशीलता ऐसी है कि पीएलआर का प्रवर्धन और लक्ष्य अनुक्रम की पहचान उस स्थिति में प्राप्त की जा सकती है जहां यह हर 5 कोशिकाओं में एक बार होता है।

विश्लेषण की विशिष्टता

पीएलआर अन्य सूक्ष्मजीवों के डीएनए और मेजबान जीव के डीएनए की उपस्थिति में एक विशिष्ट संक्रामक एजेंट के डीएनए का पता लगाना और साथ ही जीनोटाइपिंग करना संभव बनाता है। विशेष रूप से प्रतिक्रिया घटकों (प्राइमर) का चयन करके, आप तुरंत संबंधित सूक्ष्मजीवों के डीएनए का पता लगा सकते हैं।

पीएलआर पद्धति की बहुमुखी प्रतिभा

दाईं ओर, मनुष्यों में संक्रामक बीमारियों और कंजेस्टिव बीमारियों के पीएलआर निदान के लिए, आप समान ज्ञान का उपयोग कर सकते हैं, नमूने (नमूने) तैयार करने और विश्लेषण करने के लिए सार्वभौमिक प्रक्रियाओं का पालन कर सकते हैं, साथ ही समान सेट और अभिकर्मकों का भी पालन कर सकते हैं।

बचने वाला समय

पीएलआर का एक महत्वपूर्ण लाभ सांस्कृतिक सूक्ष्मजीवविज्ञानी कार्य के चरणों की संख्या है। नमूने तैयार करना, प्रतिक्रियाएं करना और अधिकतम राहत और बहुत सारे स्वचालन के परिणामों का विश्लेषण करना। किसी भी स्थिति में, परिणाम जल्दी ही 4-5 साल तक गिर सकते हैं।

पीएलआर पद्धति की दक्षता

नैदानिक ​​सामग्री की व्यापकता का अध्ययन किया गया

पोलीमरेज़ लैंज़िग प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप, न केवल रोग से जैविक सामग्री, बल्कि कई अन्य सब्सट्रेट्स की भी पहचान की जा सकती है, जिसमें डीएनए अणुओं को उच्च संवेदनशीलता वाले पत्तों से पहचाना जा सकता है, उदाहरण के लिए, पानी, मिट्टी, खाद्य उत्पाद, सूक्ष्मजीव, और भी बहुत कुछ।

इस अनूठी पद्धति के सभी मुख्य लाभ उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता, संक्रामक एजेंटों की पहचान और किसी भी मानव जीन की जीनोटाइपिंग, उच्च दक्षता और समय की बचत, सार्वभौमिक व्यावहारिक आधार हैं - वर्तमान पीएलआर पद्धति का व्यापक रूप से नैदानिक ​​​​निदान में उपयोग किया जा सकता है। चिकित्सा पद्धति, और वैज्ञानिक अनुसंधान और अन्य क्षेत्रों में समृद्धि।

ज़स्तोसुवन्न्या पीएलआर

आणविक जीव विज्ञान की वर्तमान पद्धति के परिणामस्वरूप पोलीमरेज़ लैंकुग प्रतिक्रिया के ठहराव के क्षेत्र विविध हैं। यह सामग्री की व्यापकता से समृद्ध है जिसका विश्लेषण किया जा सकता है (लगभग हर चीज जिसमें से डीएनए को अधिक स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है वह जांच का विषय हो सकता है), साथ ही चयनित प्राइमर भी। पीएलआर कार्यान्वयन के मुख्य क्षेत्र:

नैदानिक ​​दवा

• संक्रामक रोगों का निदान
• मंदी संबंधी बीमारियों का निदान
• उत्परिवर्तन का पता चला
• जीनोटाइप
• नैदानिक ​​प्रौद्योगिकियां
• आनुवंशिक पासपोर्ट का निर्माण

परिस्थितिकी

• डोवकिला के विकास की निगरानी
• खाद्य उत्पादों का विश्लेषण
• आनुवंशिक रूप से संशोधित जीवों (जीएमओ) का विश्लेषण

जहाज चिकित्सा और फोरेंसिक

• व्यक्तिगत पहचान
• पितृभूमि की स्थापना

औषध

पशु चिकित्सा

वैज्ञानिक अनुसंधान (आणविक जीव विज्ञान, आनुवंशिकी)

पीएलआर प्रयोगशाला का संगठन

अनुबंध हेतु सूचना

नाम	हमारे बारे में	Virobnitstvo	तरीका	बिल्ली.सं.

पीएलआर - संक्रमण का निदान, विभिन्न संक्रामक रोगों का पता लगाने की एक तत्काल और उच्च-सटीक विधि। अन्य विश्लेषणों में क्या अंतर है?

इस संक्षिप्त नाम को पोलीमरेज़ लैंज़ग प्रतिक्रिया के रूप में समझा जाता है। विकिपीडिया के अनुसार, केरी मुलिस का जन्म 1983, अमेरिकी इतिहास में हुआ था। उनके योगदान के लिए उन्हें नोबेल पुरस्कार से वंचित कर दिया गया।

आखिरी बार वैज्ञानिक पद्धति से ही पीएलआर विजयी हुआ था, जिसके बाद इसे चिकित्सा द्वारा सफलतापूर्वक स्थापित किया गया। जांच का सार डीएनए और आरएनए के आधार पर संक्रामक एजेंट की पहचान में निहित है। त्वचा रोग डीएनए में घुसकर उसकी संरचना को अपने अलग प्रकार में बदल देता है। परिवर्तित डीएनए को देखते ही, प्रयोगशाला सहायक को पता चल जाता है कि मनुष्यों में बीमारी कैसे होती है। पीएलआर के अन्य लाभों में:

1. संक्रमण के प्राथमिक कारण की पहचान जिसने डीएनए में "निशान" खो दिया है। जब कई बीमारियों की पहचान की जाती है, तो उन बीमारियों की पहचान करना महत्वपूर्ण है जहां यह सब शुरू हुआ। और सही निदान और प्रभावी उपचार के चयन के लिए, लैंज़ग प्रतिक्रिया का अत्यधिक महत्व है;
2. इसे पीएलआर पर स्थापित किया गया है क्योंकि डीएनए बदल दिया गया है, और परिवर्तन के एक विशिष्ट चरण में। संदिग्ध संक्रमणों को बाहर करने के लिए यह आवश्यक है;
3. पीएलआर डायग्नोस्टिक्स संवेदनशील है और एकल बैक्टीरिया और वायरस की उपस्थिति का पता लगाता है। गलत तरीके से निर्धारित स्नान या स्नान के अनियोजित रुकावट के बाद खून में बदबू खत्म हो सकती है। पीएलआर को डिकोड करते समय निदान की गई न्यूनतम मात्रा 10 ग्राहक दिन है। अन्य परीक्षण विधियाँ छोटी हैं;
4. पीपीएसएस के लक्षणों की अभिव्यक्ति के आधार पर रोगजनक सूक्ष्मजीवों का पता लगाया जाता है। प्रारंभिक चरण में पता चलने वाली बीमारी उन्नत रूप तक लंबे समय तक नहीं रहती है;
5. इसे जल्द खत्म करने के लिए बीमारियों के पीएलआर के नतीजों को ध्यान में रखा जाएगा। संक्रमण का निदान करने में 4-6 साल से थोड़ा अधिक समय लगता है। डिक्रिप्शन के साथ-साथ, पूरी प्रक्रिया में 1-2 दिन से थोड़ा अधिक समय लगता है;
6. एक समय में, 5-6 परीक्षण करने के लिए डीएनए सामग्री निकाली जाती है। एक बीमार व्यक्ति को कई बार स्मीयर कराने का अवसर नहीं मिलेगा;
7. पीएलआर और संक्रमण ट्रैकिंग अभी भी स्थिर नहीं है, यह क्षेत्र लगातार विकसित हो रहा है। बढ़ी हुई संवेदनशीलता के साथ नई परीक्षण प्रणालियों की खोज के साथ, अनुवर्ती कार्रवाई करने की संभावना कम हो जाती है। चूँकि पहले यह केवल महानगरों के निवासियों के लिए उपलब्ध था, अब क्षेत्रों में अस्पताल क्लीनिकों के डॉक्टर इसके बिना बीमारियों के इलाज की कल्पना भी नहीं कर सकते हैं।

पीएलआर पद्धति की विशेषताएं:

1. सटीकता (सुधार न्यूनतम हैं और उनकी आवृत्ति 0.01% से अधिक नहीं है);
2. संवेदनशीलता (परीक्षण रक्त और स्मीयर में व्यक्तिगत बैक्टीरिया को "गिनता" है);
3. विशिष्टता (पीएलआर उन संक्रमणों का पता लगाता है जो अक्सर एक महत्वपूर्ण चरण तक स्वयं प्रकट नहीं होते हैं);
4. विशिष्टता (उन स्थितियों में परिणामों का विश्लेषण जब अन्य जांच से कुछ भी पता नहीं चलता)।

पीएलआर विश्लेषण के परिणाम

लैंज़ग प्रतिक्रिया विधि कैसे काम करती है और आप विश्लेषण से पहले कैसे तैयारी करते हैं?

प्रयोगशाला मस्तिष्क में लैंज़ग प्रतिक्रिया उसी क्षतिग्रस्त हिस्से की पहचान करके समृद्ध डीएनए और आरएनए नमूनों के गुणन को प्रसारित करती है। एंजाइम तैयारियों की सहायता से एसिड को प्रवर्धित (संयुग्मित) किया जाता है। विकोरिस्टिक एंजाइमों का उपयोग करते हुए, प्रयोगशाला सहायक इन और संक्रमण से उत्पन्न अन्य बीमारियों के लक्षणों से पीएलआर को संरेखित करने के लिए रोगजनक डीएनए टुकड़े की पर्याप्त प्रतियां हटा देता है।

एक नियम के रूप में, नमूना या स्मीयर द्वारा ली गई जैविक सामग्री का परीक्षण किया जाता है। पहचान (यौन संचारित संक्रमणों को समझने) के लिए, पीएलआर के लिए एपिडर्मिस, गर्भाशय ग्रीवा या गर्भाशय से एक स्मीयर लिया जाता है। कभी-कभी विकोरिस्ट लड़ते भी हैं।

हेपेटाइटिस, टोक्सोप्लाज्मोसिस या एचआईवी की उपस्थिति की पुष्टि या पता लगाने के लिए, एक नस से रक्त लें। उंगली से लिया गया रक्त अक्सर दूध-नकारात्मक परिणाम देता है। मोनोन्यूक्लिओसिस का निदान खच्चर के गले की सामग्री एकत्र करने के बाद किया जाता है। बलगम एकत्र करने के बाद तपेदिक का पता लगाया जा सकता है, जैसा कि घाव वाले रोगियों में स्पष्ट रूप से देखा जाता है।

पीएलआर के लिए गर्भाशय और गर्भाशय ग्रीवा का स्मीयर एक सरल विश्लेषण है, इसमें कोई बेवकूफी नहीं है। आयोजन से 2-3 दिन पहले आपको औपचारिक जीवन जीने के लिए प्रोत्साहित किया जाएगा। आजकल विशेष स्वच्छता के लिए प्राकृतिक आधार पर जैल और दूध का उपयोग किया जाता है। आप नल से गर्म पानी पी सकते हैं। धोना बंद कर दें - घाव से एक शाम पहले प्रयोगशाला या डॉक्टर के कार्यालय में जाएँ।

क्रीम, मलहम, सपोसिटरी और स्प्रे की मदद से थ्रश का इलाज करना भी महत्वपूर्ण है। मासिक धर्म के बाद या उसके तुरंत बाद पहले श्रोणि पर एक स्मीयर लिया जाता है। सटीक परिणाम प्राप्त करने के लिए, पीएलआर स्मीयर लेने से पहले 2-3 साल तक शौचालय न जाने की सलाह दी जाती है।

जिन लोगों को लैंज़ियुग प्रतिक्रिया होती है, उनके मूत्रमार्ग से एक स्वाब लिया जाता है। जैविक सामग्री को एक बाँझ जांच या कपास झाड़ू का उपयोग करके एकत्र किया जाता है, जिसे बीज में डाला जाता है। प्रक्रिया के एक घंटे के दौरान, आपको लीवर में थोड़ी असुविधा या सूजन का अनुभव हो सकता है। लोगों को सेक्स और स्वच्छता के बारे में भी लगातार सीखना होगा। विश्लेषण से पहले की अवधि के दौरान, एंटीबायोटिक दवाओं और अन्य दवाओं के साथ उपचार निर्धारित किया जाता है। यदि संग्रह के बाद असुविधा बनी रहती है, तो जल्द से जल्द क्लिनिक जाने की सलाह दी जाती है।

यह स्वीकार्य है कि रोगी का रक्त परीक्षण किया जाए या रोगी के अंगों से स्मीयर लिया जाए। आनुवंशिक सामग्री को पीएलआर प्रवर्धन उपकरण में रखा जाता है, और एंजाइम वहां जोड़े जाते हैं। डीएनए को 90-95 डिग्री सेल्सियस तक गर्म किया जाता है जब तक कि डोरी एक सीख में न बन जाए। इस प्रक्रिया को विकृतीकरण कहा जाता है। रिएक्टर के संचालन के एक घंटे के दौरान, डीएनए और आरएनए के एक नमूने से, विश्लेषण (प्रतिक्रिया को समझने) के लिए हजारों प्रतियां बनाई जाती हैं।

पीएलआर के निदान के परिणाम

लैंज़ग प्रतिक्रिया संक्रमण की गंभीरता और स्पष्ट जटिलताओं की संख्या को दर्शाती है। जीनोटाइप को बदलने की क्षमता को प्रकट करने के लिए शेष चट्टानों को सुलझाना मानव डीएनए में उत्परिवर्तन जीन का व्यक्तिगत परिचय है।

पीपीआर संक्रमण के निदान से क्या पता चलता है?

विश्लेषण परिणामों की डिकोडिंग योग्य चिकित्सक को स्पष्ट रूप से दिखाई देती है। लैंज़िग प्रतिक्रिया की शक्ति हमें ऐसी बीमारियों की उपस्थिति की पुष्टि या पता लगाने की अनुमति देती है:

जैसा कि इस सूची से स्पष्ट है, पीएलआर डायग्नोस्टिक्स डॉक्टरों को सीमित क्षमताओं के बिना विभिन्न प्रकार की अत्यधिक विशिष्ट विशिष्टताएँ प्रदान करता है। इस पद्धति का उपयोग पल्मोनोलॉजी, वायरोलॉजी, संक्रामक रोग, ऑन्कोलॉजी, गैस्ट्रोएंटरोलॉजी, हेमेटोलॉजी, स्त्री रोग और मूत्रविज्ञान में किया जा सकता है।

पीएलआर डिक्रिप्शन: परिणाम

लैंकुग प्रतिक्रिया का विश्लेषण स्पष्ट विकृति और पुरानी बीमारियों वाले त्वचा रोगी के लिए डॉक्टरों द्वारा व्यक्तिगत रूप से किया जाता है। पीएलआर विश्लेषण के नतीजे, जैसा कि ऊपर कहा गया है, रोगजनक बैक्टीरिया की विशिष्ट विशेषताओं को दर्शाते हैं। उनसे निपटते समय, डॉक्टर बीमारी की गंभीरता और चरण निर्धारित करता है। इन संकेतकों के आधार पर, दवाओं की खुराक और उपचार के दौरान की अवधि का संकेत दिया जाता है।

एक नकारात्मक पीएलआर परिणाम का मतलब है कि एकत्रित जैविक सामग्री हर दिन कोई वायरस या संक्रमण प्रदर्शित करती है। सकारात्मक पीएलआर अलार्म से पहले एक संकेत है. साथ ही, मरीज के रक्त और अन्य जैविक क्षेत्रों में भी संक्रमण का पता चला।

चूँकि मान न्यूनतम हैं, आप बीमारी की साधारण उपस्थिति के बारे में बात कर सकते हैं, न कि केवल बीमारी के सक्रिय विकास के बारे में। संक्रमण का एक साधारण वाहक, जो केवल पीपीआर में ही प्रकट होता है, लेकिन सामान्य अन्य लक्षण नहीं दिखाता है, उसे लगातार डॉक्टर से परामर्श लेना चाहिए।

यह महत्वपूर्ण है कि घबराएं नहीं और याद रखें कि विज्ञान के लिए ज्ञात अधिकांश वायरस का इलाज जीवाणुरोधी दवाओं से किया जा सकता है। उनका चयन करना और अप्रभावी होने की स्थिति में एक को दूसरे से बदलना डॉक्टर की योग्यता से वंचित कर सकता है, जैसा कि इस और अन्य बीमारियों के उपचार से पता चलता है।

पीएलआर का डिक्रिप्शन न केवल डॉक्टर के विवेक पर, बल्कि अधिकारियों के विवेक पर भी किया जा सकता है। अक्सर हम उन महिलाओं से डरते हैं जो यौन संचारित रोगों की संभावना से बचने के लिए निकट भविष्य में गर्भवती होने की योजना बना रही हैं। जब रोगी को क्षेत्रीय परामर्श पर रखा जाता है, तो संपूर्ण निदान की कोई आवश्यकता नहीं होती है।

पीएलआर अनिवार्य महिलाओं के लिए निर्धारित है, जिनका विभिन्न कारणों से कम संख्या में गर्भपात हुआ हो। ईबीसी से पहले, निषेचित अंडे के संभावित निष्कासन के सभी कारणों की पहचान करने के लिए एक विश्लेषण किया जाता है।

लोग अक्सर रिहाई के बाद, किसी प्रकार की छुट्टियों के रोमांस या शादी के समय पीएलआर लेते हैं। डायग्नोस्टिक्स उन्हें अपने जीवन और संभावित यौन साझेदारों के स्वास्थ्य को खतरे में नहीं डालने में मदद करता है।

अक्सर, पीएलआर किसी मरीज के लिए भ्रूण अवस्था में बीमारी से उबरने का एकमात्र मौका होता है, अगर अनावश्यक जोखिम कठिन यात्रा से जटिल हो।

संक्रामक रोगों के निदान के लिए पीएलआर पद्धति का उपयोग करने वाला स्मीयर अधिक महत्वपूर्ण हो सकता है:

• संक्रामक रोगों और बीमारियों का सीधा निदान।

प्रयोगशाला निदान के कई पारंपरिक तरीके विभिन्न अप्रत्यक्ष संकेतों के लिए रोजमर्रा की बीमारी का पता लगाने पर निर्भर करते हैं। उदाहरण के लिए, एलिसा डायग्नोस्टिक्स रोगी के रक्त में पाए जाने वाले प्रोटीन पर आधारित है, जो संक्रामक एजेंटों के टूटने के उत्पाद हैं, जिसके आधार पर डॉक्टर एक और निदान कर सकते हैं। पीएलआर विश्लेषण विधि रोगी से ली गई सामग्री में रोग के विशिष्ट डीएनए नमूने की उपस्थिति का प्रत्यक्ष संकेत प्रदान करती है।

• पीएलआर डायग्नोस्टिक्स की उच्च विशिष्टता।

विश्लेषण प्रक्रिया के दौरान, जांच की गई सामग्री एक डीएनए टुकड़े का खुलासा करती है जो विशिष्ट है और एक विशेष जीव के लिए शक्ति रखता है - या तो बैक्टीरिया या वायरस। डीएनए का यह टुकड़ा अद्वितीय है और पृथ्वी पर किसी जानवर के संक्रमण के लिए विशिष्ट नहीं है।

• पीएलआर की उच्च संवेदनशीलता.

यदि रोगी से ली गई सामग्री में बैक्टीरिया या वायरस की एक से कम कोशिका हो तो संक्रमण हो सकता है। अन्य प्रतिरक्षाविज्ञानी और सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान विधियों के साथ तुलनीय: पीएलआर विश्लेषण की संवेदनशीलता - प्रति नमूना 10-100 कोशिकाएं, अन्य विधियां - 103-105 कोशिकाएं।

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• पीएलआर विश्लेषण की बहुमुखी प्रतिभा.

पीएलआर जांच के लिए, व्यावहारिक रूप से किसी भी सामग्री का उपयोग किया जा सकता है, भले ही वे अन्य तरीकों से जांच के लिए उपलब्ध न हों: बलगम, कटाव, रक्त, सीरम, थूक, स्खलन, उपकला कोशिकाओं के टुकड़े - टुकड़े आदि। संक्रमण किसी भी जैविक में हो सकता है सामग्री और ऊतक.

• पीएलआर विश्लेषण के परिणामों के लिए उच्च स्तर का समर्थन है।

विश्लेषण के लिए रोगी से ली गई सामग्री के सभी प्रसंस्करण, प्रतिक्रिया उत्पादों का पता लगाने, स्वचालित पीएलआर प्रवर्धन के लिए एक समान विधि 4-5 वर्षों में एक नए पीएलआर निदान की अनुमति देती है। साथ ही, अवलोकन के सांस्कृतिक तरीकों पर एक घंटे से भी अधिक समय खर्च किया जाता है - कई दिनों से कई दिनों तक, क्योंकि यह देखना आवश्यक है, और फिर सेल संस्कृति पर रोगज़नक़ विकसित करना आवश्यक है।

• किसी भी प्रकार के संक्रमण का निदान करने की संभावना.

पीएलआर पद्धति की उच्च संवेदनशीलता न केवल बीमारी के तीव्र चरण में संक्रमण का निदान करना संभव बनाती है, बल्कि पुराने संक्रमण का पता लगाना और एकल बैक्टीरिया और वायरस की पहचान करना भी संभव बनाती है।

पीएलआर विधि का उपयोग करने वाला एक स्मीयर उन संक्रमणों का पता लगाना संभव बनाता है जिनका फ्लोरा स्मीयर से पता नहीं लगाया जा सकता है: क्लैमाइडिया, यूरियाप्लाज्मोसिस, माइकोप्लाज्मोसिस, जननांग दाद।

जांच पद्धति और पीएलआर निदान के महत्वपूर्ण लाभ क्या हैं? पीएलआर डायग्नोस्टिक्स की कमियों में शामिल हैं:

• सकारात्मक परिणाम मिलने की संभावना

पीएलआर विश्लेषण सकारात्मक परिणाम दिखा सकता है यदि संक्रमण पहले ही मर चुका है, एंटीबायोटिक दवाओं द्वारा "मारा गया" है, और मृत कोशिकाएं अभी भी रोगी के ऊतकों में स्थित हैं। वह कैसे संभव है? काफी सरल। उदाहरण के लिए, संक्रमण उपकला के ऊतकों (अंगों या आंखों के श्लेष्म झिल्ली पर) में रहता है। उन दोनों ने इसका आनंद लिया। कोशिकाओं के उपकला को "नवीनीकृत" करने में एक घंटा लगता है। यदि कोशिकाओं के पूरी तरह से नवीनीकृत होने से पहले डॉक्टर द्वारा सामग्री को हटा दिया जाता है, तो सामग्री में संक्रमण की मृत कोशिकाएं हो सकती हैं। क्लिटिनी, जाहिर तौर पर, शरीर के आनुवंशिक पदार्थ - डीएनए या आरएनए को हटा देती है, जैसा कि पीएलआर सोचता है। पीएलआर मृत कोशिकाओं को जीवित कोशिकाओं से अलग नहीं करता है: यह डीएनए की तलाश करता है और बड़ी संख्या में उन्हें "क्लोन" करता है। इस तरह के विश्लेषण का परिणाम सकारात्मक है. वास्तव में, यह सच है कि हम सम्मोहनात्मक हैं।

किसी जीवित व्यक्ति से मृत संक्रमण को "ठीक" करने में पीएलआर की अक्षमता से पीएलआर का पता लगाना और उपचार की प्रभावशीलता को नियंत्रित करना मुश्किल हो जाता है। मुख्य नियम, निश्चित रूप से, यह सुनिश्चित करना है कि संक्रमण के मृत अधिशेष शरीर से पूरी तरह समाप्त हो जाएं, जिससे औसत व्यक्ति 4-8 वर्षों तक जीवित रहता है। इसलिए, शेष एंटीबायोटिक गोलियां लेने के बाद, उपचार की प्रभावशीलता की निगरानी के लिए पीएलआर विधि का उपयोग किया जा सकता है और किया जाना चाहिए।

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बाद के चरण में, निषेध का नियंत्रण एक अलग सांस्कृतिक पद्धति का उपयोग करके या बुवाई करके किया जा सकता है: केवल जीवित सूक्ष्मजीव जो प्रजनन करते हैं, अहिंसा के संकेत के रूप में काम कर सकते हैं।

• गार्डनरेलोसिस के निदान के लिए पीएलआर विश्लेषण का उपयोग करना उचित नहीं है, क्योंकि गार्डनेरेली - इस बीमारी से पीड़ित, कम संख्या में मामलों में, सामान्य रूप से मिट्टी में रहते हैं। विकोरिस्टिक पीएलआर वाले इन जीवाणुओं का डीएनए जल्द ही नष्ट हो जाएगा। गार्डनेरेला स्मीयर में दिखाई नहीं देता है, और इस मामले में बैक्टीरियोस्कोपी गार्डनरेलोसिस के निदान और उपचार की निगरानी के लिए एक पर्याप्त तरीका है।
• सूक्ष्मजीवों की विविधता

कोई भी सूक्ष्म जीव बदल सकता है, और साथ ही डीएनए भी। इस गैलस का सबसे खूबसूरत बट फ्लू वायरस है। एक बार बीमार होने पर व्यक्ति में वायरस के खिलाफ एंटीबॉडी विकसित हो जाती है। विशुद्ध रूप से सैद्धांतिक रूप से, यदि हम केवल एक बार भी फ्लू से बीमार हुए, तो फ्लू की तरह, यह हमारी गलती नहीं है कि हम दोबारा बीमार पड़ेंगे। हमारे गले में लगभग दर्द होने लगता है। कारण क्या है? वायरस "उत्परिवर्तित" होता है, अपने जीनोम को थोड़ा "बदलता" है, और हमारी प्रतिरक्षा प्रणाली, हमारे एंटीबॉडी अब पुराने मेहमान को नए रूप में "पहचान" नहीं पाते हैं। यह कोई अजीब बात नहीं है कि मैं बार-बार फ़्लू से बीमार हो रहा हूँ...

एक एम्पलीफायर (पीएलआर परीक्षण प्रणाली) को डिजाइन करते समय, किसी दिए गए सूक्ष्मजीव के लिए विशिष्ट डीएनए टुकड़ा चुना जाता है जो परिवर्तन के लिए सबसे कम संवेदनशील होता है। इसे डीएनए के तथाकथित अत्यधिक रूढ़िवादी खंड से "चयनित" किया गया है। वैकल्पिक रूप से, सूक्ष्मजीवों की प्रचुरता इस तथ्य को जन्म दे सकती है कि अध्ययन किए गए जीव के कुछ जीनोटाइप या उपभेद जीनोम में उत्परिवर्तन का कारण बन सकते हैं जो प्रवर्धित (क्लोन) होता है, और इस प्रकार परीक्षण प्रणाली द्वारा पकड़ा नहीं जाता है।

इस प्रकार, अलग-अलग परीक्षण प्रणालियाँ उन कारणों में से एक हैं जिनकी वजह से एक ही पीएलआर पद्धति का उपयोग करके विभिन्न प्रयोगशालाओं और विभिन्न क्लीनिकों में किए गए विश्लेषण बिल्कुल अलग परिणाम दिखा सकते हैं। जितना संभव हो उत्परिवर्तन से बचने के लिए, अब परीक्षण को विनियमित करने के लिए मानक विकसित किए गए हैं (क्रॉस-प्रतिक्रियाओं के सत्यापन के साथ-साथ संकेतित रोग के पृथक उपभेदों का परीक्षण भी शामिल है), जिसके लिए परीक्षण प्रणाली की आवश्यकता होती है, सबसे पहले बाज़ार और क्या आपके स्वास्थ्य का निदान करने के लिए विकोरिस्तान का उपयोग किया जाएगा? अच्छे क्लीनिक और प्रयोगशालाएँ परीक्षण प्रणालियों की शेष पीढ़ियों के लिए विकोरिस्तान का उपयोग क्यों करते हैं। और हमारा मेडिकल सेंटर "यूरोमेडप्रेस्टीज" उन कुछ में से एक है जो अपने ग्राहकों को स्पष्ट निदान प्रदान कर सकता है।