Ինչպես իրականացնել PCR ախտորոշման վերլուծություն PCR մեթոդով: Հետաքննության բարձր զգայունություն

PLR (պոլիմերազային Lanzug ռեակցիա) մոլեկուլային կենսաբանության ձեռքբերումն է, 20-րդ դարի վերջի և 21-րդ դարի սկզբի կլինիկական լաբորատոր ախտորոշման հիմնական մեթոդներից մեկը, որը մեծ վնաս է հասցնում բժշկական գիտության տարբեր հիվանդներին:

Այսպիսով, քանի որ մարդու մարմնի միլիոնավոր բջիջների մեջտեղում ոչնչացվում է ոչ թե կենդանի վիրուսը, այլ նրա ԴՆԹ-ի միայն մի մասը, ապա PLR-ն, քանի որ նրան չի կարելի անհանգստացնել, կարող է փորձել: խուսափել առաջադրանքից և տեղեկացնել «այլմոլորակայինի» առկայության մասին «դրական արդյունք. PLR-ի էությունը նրա հիմնական առավելությունն է:

Խոնավացում և թերություններ

Լաբորատորիան, որն իրականացնում է PLR ախտորոշում, մեծ կարիք ունի թեստային համակարգերի առկայության և բժշկական անձնակազմի որակավորման: Սա բարձր տեխնոլոգիական լաբորատորիա է, որն ունի բարձր զգայուն և բարձր սպեցիֆիկ ռեակտիվների լավ պատվիրված զինանոց, ուստի առանձնահատուկ պակասություն չկա: Այն ամենը, ինչը կլինիկական դրսևորումների բացակայության դեպքում դրական արդյունք է ցույց տալիս և այդպիսով բժշկին դնում երկընտրանքի առաջ՝ սկսե՞լ բուժումը, թե՞ ոչ:

Բժիշկը, ով հոգ է տանում հիվանդի մասին, սկսում է կասկածել թեստի արդյունքների հավաստիությանը, քանի դեռ հիվանդության նշաններ չկան։ Այնուամենայնիվ, PLR համակարգի բարձր զգայունությունը հիմնված է այն հիշողության վրա, որ այն բացահայտում է արթնացման ազդանշան նախակլինիկական փուլում, և դրական արդյունքն այս դեպքում մեկ տարուց շուտ է, այլ ոչ թե հեռահար հարվածով: Ելնելով դրանից՝ բժիշկը պատասխանատու է թերապիայի օգտակարության վերաբերյալ սեփական որոշումներ կայացնելու համար՝ հաշվի առնելով «կողմ» և «դեմ» այլ փաստարկները։

Պոլիմերազ Lanziug ռեակցիայի օգտագործմամբ ախտորոշման առավելություններն ակնհայտ են.

• Բարձր կոնկրետություն, որը հասնում է 100%-ի, պայմանավորված է նմուշում նուկլեինաթթուների մասնիկների առկայությամբ, որոնք հզոր են որոշակի օրգանիզմում կամ օտար են մարդկանց համար.
• Բարձր արտադրողականություն, և նույնիսկ PLR-ը բարձր տեխնոլոգիական ավտոմատացված տեխնիկա է, որը հնարավորություն է տալիս նյութի հավաքագրման օրը թեստավորում անցկացնել և պարբերաբար բուժել հիվանդին ցանկացած անհանգստության դեպքում.
• PLR-ն, աշխատելով մեկ անսարքության վրա, կարող է իրականացնել մի շարք հետազոտություններ այդ մասին բացահայտել մի շարք տոներկարծես նա այդպիսի գանձ կլիներ: Օրինակ՝ քլամիդիալ վարակը ախտորոշելիս, երբ PLR-ն կիրառվում է հիմնական մեթոդների նկատմամբ, քլամիդիոզը հայտնաբերելու համար կարելի է հայտնաբերել Նեյսեր (գոնոկոկ)՝ ահազանգող։ Ավելին, արդյունքների հավաստիության վրա բացասական ազդեցություն չկա.
• Փորձարկում PLR մեթոդով բացահայտում է վտանգավոր միկրոօրգանիզմներ ինկուբացիոն շրջանումԵթե ​​հիվանդությունը դեռ չի հասել մարմնի ավարտին, ապա վաղ ախտորոշումը ակնկալում է պաթոլոգիական գործընթացի հետագա զարգացումը, ինչը հնարավորություն է տալիս պատրաստվել ինչ-որ նոր բանի և ընդունել այն ամբողջից:

Բացի այդ, ախտորոշման ժամանակ երբեմն առաջացող խառնաշփոթը վերացնելու համար PLR-ն իրեն պաշտպանում է այն փաստով, որ դրա արդյունքները կարող են գրանցվել (լուսանկարչություն, համակարգիչ)՝ օգտագործելով փորձագետների մոտ դրանք վիկորիզացնելու մեթոդը, որոնք կարող են անհրաժեշտ լինել:

PLR տեսակների նորմը բացասական արդյունքների գնահատումն է, որը ցույց է տալիս օտար նուկլեինաթթուների բեկորների առկայությունը, դրական վկայությունը ցույց է տալիս մարմնում վարակի առկայությունը, թվային արժեքները ցույց են տալիս վիրուսի ուժը և դրա կոնցենտրացիան թեստավորման պահին: Proteo-ն արտաքինից վերծանել է այս բժշկի վերլուծությունը, ով հատուկ ուսումնասիրություն է կատարել «PLR» թեմայով: Անիմաստ է փորձել ինքնուրույն մեկնաբանել արդյունքները, քանի որ կարող եք, հենց որ ամեն ինչ պատահի, սխալ հասկանալ և սկսել պարծենալ։

Ինչի՞ց է վախենում PLR-ը, ի՞նչ կարող է անել, և ինչպե՞ս կարող ենք պատրաստվել դրան:

Ինչպես ցանկացած այլ հետաքննություն, Երբեմն թեստի արդյունքները կա՛մ դրական են, կա՛մ բացասական, դե PLR-ը մեղավոր չէ։ Նման իրավիճակներում կարող են առաջանալ հետևյալը.

1. Տեխնոլոգիական գործընթացի խախտում ռեակցիայի փուլերից մեկին.
2. Nedotrimannya կանոնները նյութի հավաքման, դրա պահպանման և տեղափոխման համար.
3. Նյութում երրորդ կողմի տարրերի առկայությունը.

Այսինքն, մինչև PLR-ը` վարակների ախտորոշումը, անհրաժեշտ է դրան մոտենալ հարգալից, զգույշ և ճշգրիտ, հակառակ դեպքում նյութը կարող է փոխել իր կառուցվածքը կամ ամբողջությամբ փլուզվել:

PLR ախտորոշման փուլերը. Միլկովի արդյունքները կարող են խաթարվել հետաքննության ցանկացած փուլում։

Ինֆեկցիաների PLR ախտորոշումը, ի թիվս այլ լաբորատոր մեթոդների, դասվում է «ոսկե ստանդարտների» կատեգորիային, ուստի դրանք կարող են օգտագործվել հարուստների առօրյա հիվանդությունները հայտնաբերելու համար, որոնք առաջին հայացքից ոչ մի էական բան չեն հուշում: Ինձ նման.

• Տարբեր տեղայնացման տուբերկուլյոզ, թոքաբորբ (ներառյալ քլամիդիայով առաջացած ատիպիկ թոքաբորբը);
• Մանկական վարակներ (կովի կարմրախտ, խոզուկ, ծլվլոց);
• Դիֆթերիա;
• Սալմոնելլա;
• Կենդանաբանական վարակիչ հիվանդություն - լիստերիոզ (հիվանդությունը բնութագրվում է մի շարք ախտանիշներով ՝ ավշային հանգույցների, կենտրոնական նյարդային համակարգի, ներքին օրգանների վնասման պատճառով);
• Էպշտեյն-Բառի վիրուսով առաջացած հիվանդություն (վարակիչ մոնոնուկլեոզ և այլն);
• Ուռուցքաբանական պաթոլոգիա, որը հրահրվել է պապիլոմավիրուսային վարակով (այս տեսակի ՄԶԾ);
• Բորելիոզ (Լայմի հիվանդություն, տիզային էնցեֆալիտ);
• Helicobacter pylori վարակը, որը առաջանում է Helicobacter pylori միկրոբով, որը ապրում է մարդու վուլվայում: Ապացուցված է, որ Helicobacter pylori-ն առաջացնում է կեղևի կամ հաստ աղիքի 12-նիշանոց քաղցկեղի զարգացում;
• և գործնականում ամեն ինչ:

Պետության կողմից փոխանցվող վարակների PLR ախտորոշումը հատկապես կարևոր է, երբ հիվանդության բեկորները, այսպես գոռալով, հաճախ անցնում են դժվարին ժամ առանց որևէ կլինիկական դրսևորման, այնուհետև, երբ սկսվում է ծանրությունը, սկսում է ակտիվությունը: , նման կերպ սպառնում են առողջությանը և խաթարում երեխայի կյանքը։ Նույն կերպ օգտագործեք i-ն: Նրանց գործողությունները («ջահը») տեղադրվում են անմիջապես և մինչև ІПШ, այնուհետև մնացածը պահանջում է զեկույցի քննարկում: Դուք կարող եք ավելին իմանալ ամենատարածված մեթոդների մասին հոդվածի հաջորդ բաժիններում:

Ինչպե՞ս ճիշտ պատրաստվել՝ հուսալի արդյունք ստանալու համար:

Կարևոր է նշել, որ PLR-ի նախապատրաստումը պարզ է և հիվանդի կողմից որևէ հատուկ ջանք չի պահանջում: Պետք է ստորագրել երեք անհարմար առաջադրանք.

1. Մի կապվեք հոդվածի հետ վերլուծության ամսաթվից 24 տարի առաջ.
2. Երակից արյուն հավաքելու և վերլուծելու համար դուք պետք է գաք պաս նավակ, բայց մինչև չխոսեք չեք կարող խմել.
3. Տվեք ինձ որքան հնարավոր է շուտ (ստերիլ բանկա, դրեք դեղատան դիմաց):

PLR-ը կարող է իրականացվել ցանկացած կենսաբանական միջավայրում

PLR մեթոդը չի խանգարում «արյունարբուությանը», այն օգտագործում է կենսաբանական միջավայր՝ վարակիչ նյութերի փոխանցումը կանխելու համար: ընտրել – այն, ինչ պետք է ձեռնարկվի հետագա հետազոտության համար, կուղարկվի բժշկի:

Այս կերպ, ահազանգ փնտրելիս, բացի արյան անալիզից (չնայած մենք կարող ենք նաև մոտենալ և, շատ դեպքերում, զուգահեռաբար ընթանալ այլ նյութերին), կարող եք վիկորացնել.

• (միզասեռական տրակտի տեսողություն);
• բերանի խոռոչի, կոնյուկտիվայի, քիթ-կոկորդի և զարկերակների լորձաթաղանթի ջարդոն (կանանց համար՝ արգանդի վզիկի և մկանային հյուսվածքից, տղամարդկանց համար՝ միզածորանից);
• Սլինու;
• Սերմի;
• առջևի որթից;
• Պլասենցային հյուսվածք և ամնիոտիկ հեղուկ (ամնիոտիկ հեղուկ);
• Նստվածք (ցենտրիֆուգումից հետո), օրինակ՝ IPSS-ի և mycobacterium tuberculosis-ի տեսակները բացահայտելու համար.
• Խորխը և պլևրային հեղուկը այս նույն նյութով;
• էքսուդատի;
• ողնուղեղը, եթե կա կենտրոնական նյարդային համակարգի վարակիչ վնասվածքի կասկած.
• Բիոպսիայի նյութ (բիոպտատ), վերցված լյարդից, 12 ճանկերով աղիքից, սքյուտից և այլն։

Նախքան վերը նշվածը, ես կցանկանայի ավելացնել, որ բոլոր դեպքերում, քերծվածքներում և դիտարկումներում փորձարկման նյութը բավարար կլինի, PLR մեթոդով որոշ փորձարկումներ մեծ ջանքեր չեն պահանջում, վերլուծությունը սահմանափակվում է միայն. շատերը Միկրոլիտրները պետք է վերցվեն էպենդորֆի տիպի միկրոխողովակից և ուղարկվեն Վիվչենիա:

Հիվանդություն և լճացում PLR

VIL և պոլիմերազային Lanzug ռեակցիա

Եթե ​​դուք անանուն թեստավորում եք անցնում և դրական արդյունքներ եք ունենում, իմունոբլոտինգի ախտորոշումը պետք է նորից կրկնվի: Ախտորոշումը հաստատելուց հետո հիվանդին նշանակվում են լրացուցիչ հետազոտություններ.

1. Հիմնվելով CD 4 լիմֆոցիտների քանակի բացարձակ արժեքների լրացուցիչ իմունոլոգիական ռեակցիաների վրա (իմունային կոմպետենտ բջիջներ՝ T-օգնականներ կամ երիկամային բջիջներ), որն վարակը առաջինը հարվածում է մեզ, որից հետո դրանք սպառվում են, նրանց հիմնական իշխանությունները չեն կարող ոչնչացնել «իրենցը»: «և ուրիշի»: Արյան պլազմայում շրջանառվող ՌՆԹ վիրուսը սխալմամբ համարվում է մարմնի նորմալ բջիջների հետ և չի արձագանքում դրանց.
2. ՌՆԹ վիրուսի հայտնաբերումը PLR մեթոդով և վիրուսային մասնիկների կոնցենտրացիայի բաշխումը ըստ փուլի, պաթոլոգիական գործընթացի ծանրության և կանխատեսման՝ հիմնված այս տվյալների հավասարակշռության վրա:. Ակնհայտ է, որ «նորմ» բառը բացակայում է պլանից, ուստի արձագանքը միշտ դրական է, և թվային արժեքների վերծանումը ընկնում է բժշկի իրավասության ներքո:

PLR և հեպատիտ

PLR մեթոդը կարող է հայտնաբերել հեպատիտը, ամենից հաճախ թեստն օգտագործվում է հեպատիտի ախտորոշման համար, որը վատ է ախտորոշվում այլ մեթոդներով:

Հեպատիտ C-ի վիրուսը (ՌՆԹ) պատասխանատու է մարդու մարմնում իր վարքագծի համար: Լյարդի բջիջների (հեպատոցիտների) գենոմում խրված՝ նա մնում է այնտեղ ճիշտ ժամանակին, որը կարող է հայտնվել 2 կամ 20 տարի հետո, ուստի բժիշկները նրան անվանում են «մահացած մարդասպան»։ Հեպատիտ C-ն հանգեցնում է լյարդի պարենխիմում չարորակ գործընթացի զարգացմանը, որն արտահայտվում է հետագա փուլերում։ Իմունային համակարգը այս ամենը չի նշում՝ վիրուսը շփոթելով հեպատոցիտի հետ: Այնուամենայնիվ, վիրուսի դեմ հակամարմինները շատ դեպքերում առաջանում են, և դրանք չեն պաշտպանում իմունային համակարգը: Հեպատիտ C-ի համար ELISA-ի ախտորոշման համար այն այնքան էլ տեղեկատվական չէ, քանի որ այն ցույց է տալիս, որ վիրուսը կորցրել է հետքերը, և արդյոք այն ինքնին վարակված է, անհայտ է: HCV վարակի դեպքում տեղի է ունենում ինքնաոչնչացում, քանի որ վիրուսի դեմ հակամարմինները կորչում են և շարունակում են ընդմիշտ շրջանառվել (իմունոլոգիական հիշողություն): PLR-ը զգալիորեն նախորդում է հակամարմինների ստեղծմանը և կարող է հայտնաբերել վիրուսային մասնիկը արդեն 1-1,5 օրվա ընթացքում, մինչդեռ AT-ն կարող է հայտնվել ծննդաբերությունից 2 ամիս ընդմիջումներով:

PLR ախտորոշումը այն դեպքերում, երբ հեպատիտ C-ի վիրուսը կասկածվում է մարդու մարմնում տարածման մեջ, հետազոտության ամենաօպտիմալ մեթոդն է, քանի որ հնարավոր է միայն ճանաչել «օրինական թշնամու» առկայությունը հիվանդի արյան կամ լյարդի բիոպսիայում: .

Այնուամենայնիվ, երբեմն կարող է լինել նոպա, եթե AT-ն դրական է, իսկ PLR-ի արդյունքը բացասական է: Այս մեթոդը կիրառվում է, երբ վիրուսը շատ ցածր ինտենսիվություն ունի կամ երբ այն «քնած վիճակում» մտնում է լյարդ՝ առանց արյան մեջ մտնելու։ Ճշմարտությունն իմանալու համար հիվանդից վերցվում է կրկնակի վերլուծություն, կամ նույնիսկ մեկից ավելի:

Պապիլոմավիրուսային վարակ

Քանի որ անհնար է ինքնավարակություն առաջանալ, հնարավոր է նաև, առանց որևէ բան դրսևորելու, երկար ժամանակ պահպանվել տիրակալի մարմնում, ում գնի վրա ես չեմ կասկածում, քանի որ PLR բեկորները չեն եղել. զարգացել է, իսկ հիվանդության ախտանշանները եղել են ամենօրյա։ Այնուամենայնիվ, պապիլոմավիրուսային վարակի առկայությունը, լինի դա թաքնված, թե թաքնված, հեռու է մարդու առողջության համար լավ լինելուց, և հատկապես վտանգավոր է քաղցկեղ առաջացնող վիրուսի տեսակը կրելը (տիպեր 16, 18):

Ամենից հաճախ բնակչության կեսը տառապում է ՆՏԱ-ով, քանի որ վիրուսն ավելի հավանական է ազդել մարմնի կանացի հատվածի և հատկապես արգանդի վզիկի վրա, որտեղ տարբեր տեսակի վիրուսներ առաջացնում են դիսպլաստիկ պրոցեսների զարգացում, այնուհետև արգանդի վզիկի քաղցկեղը, ինչպես դա արվում է: չթողնել դիսպլազիան և ազատություն տալ վիրուսին: Այսպիսով, առանցքի՝ պոլիմերազային Լանցուգի ռեակցիան բացահայտում է վիրուսային ԴՆԹ-ն, այնուհետև կնոջ մարմնում նստում է կամ «վատ» կամ «լավ» (ուռուցքածին կամ ոչ օնկոգեն) տեսակը։

IPSS և TORCH այլ վարակներ

Ակնհայտ է, որ պոլիմերազային Lanczug ռեակցիան կարող է հայտնաբերել ցանկացած օտար կառուցվածք, որը ձևավորվում է նուկլեինաթթուներից, ուստի թեստը հարմար է SPS և TORCH բոլոր վարակները հայտնաբերելու համար, որոնք միշտ չէ, որ հայտնաբերվում են: Հնարավո՞ր է գոնոկոկի հայտնաբերման համար այդքան թանկ հետազոտություններ անցկացնել, որոնք մատչելի են և ավելի էժան:

TORCH վարակները և IPSS-ը փոխկապակցված են, ուստի կարևոր է որոշել, թե որ խումբը պետք է վերագրվի միմյանց: Նրանց համար կարող է դժվար լինել մեծանալը, քանի որ նրանք չեն ենթարկվի միկրոօրգանիզմների տարբեր խմբերի, որոնք կարող են փոխանցվել պետության կողմից, կա՛մ միայն երիտասարդ ուղեղների համար (իմունային անբավարարություն), կա՛մ կարող են դառնալ նվազ հետաքրքիր՝ հնարավոր կարևորության համար: բացասական ներհոսք հղիության և հղիության ընթացքում.

PLR-ը ձեռքբերովի վարակների հայտնաբերման հիմնական մեթոդն է

Կլինիկական դրսևորումների զարգացումը հիմնված է տարբեր գործոնների վրա, որոնք որոշվում են միայն PLR-ի հզորությամբ, որոնք հիմնական խնդիրներն են ինչպես ELISA-ի, այնպես էլ նաև. որպես մեկ հաստատող թեստ, հատկապես հիվանդության ախտանիշների համար:Նման բարդ իրավիճակի պատճառ կարող է լինել պոլիմանրէային վարակը, որը, բացի ակնհայտ հիվանդություններից, ներառում է նաև հոգեկան հարուցիչներ։

Ուրեապլազման առավել հաճախ հանդիպում է միկոպլազմայով զույգերի մոտ:Իզուր չէ. Այս տեսակները, ինչպես քլամիդիան, ոչ վիրուսներ են, ոչ բակտերիաներ, նրանք ապրում են բջիջների մեջտեղում և կարող են կապված լինել IPSS-ի հետ, չնայած նրանց ներկայությունը առողջ մարմնում նույնպես հազվադեպ չէ: Այսպիսով, հիվանդ մարդուց առողջ քիթը հեռացնելու համար անհրաժեշտ են հատուկ մեթոդներ, իսկ PLR-ը համարվում է ամենահուսալիը՝ հաշվի առնելով այդ միկրոօրգանիզմների վարքագծի առանձնահատկությունները և այլն, և հետազոտություններն անարդյունավետ են գտնում։

Ինչ է խնդիրը (տիպ 1, 2) և որը նույնպես վերաբերում է հերպեսի վիրուսին (տիպ 5), ապա այստեղ իրավիճակը միանշանակ չէ։ Երկրագնդի բնակչության վարակման մակարդակը մոտենում է 100%-ի, ուստի այս շրջանում շատ կարևոր է բացահայտել վիրուսը և դրա չափաբաժինը, որը հատկապես դեր է խաղում վիրուսայնության մեջ, և նույնիսկ մեծահասակների մոտ վիրուսը ապրում է նրա մարմնում։ հաճախ չի տրվում ծարավին և հիվանդության նշան չի տալիս.

Հետևաբար, չպետք է անտեսել բժշկի դեղատոմսը նման ռեակցիայի համար, և նույնիսկ որոշ դեպքերում պոլիմերազային Լանցուգի ռեակցիան լաբորատոր ախտորոշման պարտադիր և անհրաժեշտ մեթոդ է, որը կարող է պաշտպանել լուրջ բարդություններից ոչ միայն nku-ն, այլև փոքրիկ մարդը, ինչպես. եթե նա դեռ ծնված չլիներ։

Մենք կցանկանայինք հասկանալ, որ նման հրաշք մեթոդը, ինչպիսին PLR-ն է, ծառայում է մարդկությանը ավելի քան 30 տարի: Այս թեստն անելիս չպետք է սահմանափակվել վարակիչ հիվանդությունների ռիսկով։ Մոլեկուլային կենսաբանության ոլորտում տարածված պոլիմերազային Լանցուգի ռեակցիան անքակտելիորեն կապված է գենետիկայի հետ։ հաջողությամբ կապվում է քրեական հետախույզի հետ՝ կոնկրետ անձի ինքնությունը պարզելու համար, նավի բժշկության մեջ անասնաբուժության ստեղծման համար, անասնաբուժության մեջ, որպես կենդանիների կլինիկա, կարող են գույք գնել ճանապարհին, ինչպես նաև այլ ոլորտներում (արդյունաբերություն, գյուղական կառավարություն և այլն):

Տեսանյութ. PLR - այդ լճացման էությունը

Բակտերիաների գենետիկա Տեղեկություն մեկ այլ գործունեության համար:

Պոլիմերազ Lanzug ռեակցիա

Պոլիմերազային Lanczug-ի ռեակցիան մեթոդ է, որը թույլ է տալիս վերլուծվող նմուշի մի շարք ԴՆԹ մոլեկուլների մեծ աճ (ամպլիֆիկացում) (ներառյալ կենսաբանական նյութում կամ մաքուր կուլտուրայում):

PLR-ի՝ որպես մանրէաբանության ախտորոշման մեթոդի հիմնական առավելություններն են շատ բարձր զգայունությունը, որը թույլ է տալիս հայտնաբերել ախտածինների չափազանց ցածր կոնցենտրացիաները նմուշներում, ինչպես նաև կարգավորվող յուրահատկությունը, որը թույլ է տալիս հայտնաբերել արարածներին ընդհանուր, տեսակների կամ ենթառատեսակների վրա: մակարդակ. PLR-ի հիմնական մասը պայմանավորված է նրա բարձր զգայունությամբ. նմուշները կարող են հեշտությամբ աղտոտել ԴՆԹ-ն դրական հսկիչից կամ PLR արտադրանքից, ինչը կհանգեցնի բացասական-դրական ռեակցիայի: Սա խիստ սահմանափակումներ է դնում այն ​​մտքերի վրա, որոնցում իրականացվում է PLR-ի և պատրաստի PLR արտադրանքի հետ աշխատանքը:

Իրականացրել է PLR.Պատրաստվում է ռեակցիայի խառնուրդ հետևյալ բաղադրիչները միավորելու համար.

Ես տեսա ԴՆԹ հետագծված նմուշից,

Բուֆերնի Ռոզչին

Mg2+ իոններ (անհրաժեշտ է ֆերմենտի համար),

Երկու պրայմերները միաշղթա կարճ ԴՆԹ մոլեկուլներ են (առավել հաճախ 18-ից 24 նուկլեոտիդների երկարություն), որոնք լրացնում են հայտնաբերված ԴՆԹ-ի տարբեր հաջորդականությունների ծայրերը:

Սումիշ դեզօքսինուկլեոտիդ տրիֆոսֆատներ:

Ջերմակայուն ԴՆԹ պոլիմերազա (առավել հաճախ վիկորացված Taq պոլիմերազ - պոլիմերազա, որը նկատվում է Թերմուս ջրային).

Այնուհետև այս ռեակցիան կարող է տեղադրվել ուժեղացուցիչի մեջ, որն իրականում ծրագրավորվում է թերմոստատի միջոցով: Ուժեղացուցիչում իրականացվում է ջերմաստիճանի փոփոխությունների 30-40 ցիկլ։ Այս ցիկլերի մաշկը բաղկացած է երեք փուլից (բաժանում Նկար 1).

Դենատուրացիա (ջերմաստիճանը 94°W) – ջրի նիզակները պայթում են, և ԴՆԹ-ի նիզակները տարբերվում են:

Պրայմերներն ընկել են (ջերմաստիճանը մոտ 50-60°C է) – այբբենարաններն ավելացվում են ԴՆԹ-ի հաջորդականությունների ծայրերին: Միևնույն ժամանակ, ցածր ջերմաստիճանի դեպքում, հետագծված հատվածից ելքային ԴՆԹ-ի շղթաների բարձրացումը (վերածնումը) էներգետիկ առումով ավելի բարենպաստ է, քանի որ ռեակցիայի խառնուրդում պրայմերների կոնցենտրացիան շատ մեծության աստիճաններով է: Կախված ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիայից հաջորդականությունը (օրինակ, PLR-ի ցողունային ցիկլերի վրա), պրայմերների ռեակցիան ընթանում է ԴՆԹ-ի նվազմամբ: Հալման ջերմաստիճանը ընտրվում է՝ ելնելով այբբենարանների հալման (դենատուրացիայի) ջերմաստիճանից:

Երկարացում (ջերմաստիճանը 72 °C է) – ԴՆԹ պոլիմերազը արտադրում է երկար ԴՆԹ մատրիցի պրայմերներ: Ջերմաստիճանը ցույց է տալիս վիկորացված ԴՆԹ պոլիմերազի արտադրության օպտիմալ ջերմաստիճանը:

Արդյունքների հայտնաբերումը տարբերվում է PLR-ի տարբեր տարբերակներում և նկարագրված է «PLR-ի տեսակները» բաժնում:

PLR-ի դինամիկան

PLR-ի վաղ փուլերում մի շարք կրկնակի ԴՆԹ մոլեկուլներ, որոնց չափը որոշվում է այբբենարանի վայրէջքի վայրերի միջև եղած դիրքով, փոխազդում են մաշկի ցիկլի հետ: Այս կերպ ստեղծվում են գոյություն ունեցող ԴՆԹ-ի մոլեկուլների փոքր քանակություն, որոնք կարող են արդյունահանվել (բաժանում Նկ. 2):

Այսպիսով, վաղ ցիկլերում PLR արտադրանքի ուժը նկարագրվում է m*2 n բանաձևով, որտեղ m-ը նմուշի ԴՆԹ-ի եկամտաբերությունն է, n-ը ցիկլերի քանակն է: Այնուհետև ռեակցիան հասնում է սարահարթի: Դա տեղի է ունենում ռեակցիայի արտադրանքի կուտակման, պրայմերների և դեզօքսինուկլեոտիդ տրիֆոսֆատների կոնցենտրացիայի նվազման, ինչպես նաև պիրոֆոսֆատի կոնցենտրացիայի բարձրացման միջոցով (նկ. 3):

Ռիզնովիդի PLR

Կոնվենցիա PLR

PLR ռեակցիայի այս տարբերակում այնուհետև որոշվում է ցիկլերի քանակը (30-40), որից հետո վերլուծվում է, թե արդյոք հրաբխային ԴՆԹ-ի մոլեկուլների կուտակումը ռեակցիայի խառնուրդում է կուտակվել:

Վարիկոզի դեպքում PLR-ի բեմադրման այս տարբերակը որպես ախտորոշման մեթոդ հստակ մեթոդ է։ Դրական արձագանքը ցույց է տալիս նկարում հայտնաբերված ԴՆԹ մոլեկուլների հետքերի առկայությունը: Բացասական արձագանք՝ իր գոյության մասին տեղեկացնելու համար։ ԴՆԹ-ի ելքային մոլեկուլների քանակական գնահատումն անհնար է բարձրավանդակի արձագանքի միջոցով:

Արտադրանքի նույնականացման հիմնական մեթոդը ագարոզայի կամ պոլիակրիլամիդային գելերի վրա էլեկտրոֆորեզն է: PLR արտադրանքները բաժանվում են գելի մեջ էլեկտրական դաշտի տակ՝ նվազեցնելու իրենց մոլեկուլային քաշը: Գելը պարունակում է միջանկյալ ծորենի (լյումինեսցենտ ԴՆԹ-ի հետ կապված վիճակում՝ առավել հաճախ բրոմիդ էթիդ): Այսպիսով, ուլտրամանուշակագույն լույսի ազդեցության դեպքում հնարավոր կլինի հայտնաբերել նշանի առկայությունը կամ առկայությունը, որը ցույց է տալիս անհրաժեշտ մոլեկուլային զանգվածի ԴՆԹ-ն։ Ախտորոշման նպատակով PLR-ի իրականացման ժամին միշտ դրվում է ռեակցիայի դրական և բացասական հսկողություն, ինչը հանգեցնում է նույն նշաններին (բաժանում Նկ. 4):

PLR իրական ժամանակում

PLR արտադրության այս տարբերակում PLR արտադրանքի ուժը ռեակցիայի խառնուրդում անընդհատ գրանցվում է ռեակցիայի ընթացքում: Սա հնարավորություն է տալիս առաջացնել ռեակցիայի կոր (բաժանում Նկ. 3) և դրանից բխելով մասնիկներից մի շարք տարբեր ԴՆԹ մոլեկուլներ հանել։

Իրական ժամանակում իրականացվող PLR-ի տեսակներից մեկը վիկորիստիկ ինտերկալացնող նյութի օգտագործումն է, որն ուղղակիորեն ավելացվում է ռեակցիայի խառնուրդին (առավել հաճախ վիկորիստիկ SYBRGreen): Մեկ այլ տեսակ է լյումինեսցենտային զոնդերի տեսակներից մեկի օգտագործումը, որոնք միացված են PLR արտադրանքի մեջտեղի տարածությանը, ինչը թույլ է տալիս բարձրացնել հայտնաբերման առանձնահատկությունը (բաժանում Նկար 5): Ֆլյուորեսցենտային հայտնաբերումն իրականացվում է անընդհատ ռեակցիայի ընթացքում։

Բացի արագ հայտնաբերման հնարավորությունից, բացահայտվում են իրական ժամանակում PLR-ի այլ առավելություններ՝ համաձայն կոնվենցիայի: PLR-ի այս տարբերակը ավելի պարզ է, արագ, ինչպես նաև չի պահանջում խողովակներ բացել PLR արտադրանքներով, ինչը նվազեցնում է այլ մասնիկների աղտոտումը: Հիմնական թերությունը ուժեղացուցիչի ավելի բարձր կատարողականությունն է, որը պայմանավորված է բնօրինակի համեմատ ֆլյուորեսցենտը հայտնաբերելու ունակությամբ:

Թվային Kilkisna PLR

PLR-ի նոր, թանկարժեք և դեռևս ցածր լայնությամբ տարբերակ, որը հնարավորություն է տալիս ավելի ճշգրիտ որոշել ԴՆԹ-ի ուժը նմուշում: Այս տարբերակում խառնուրդի ռեակցիան, որը պարունակում է լյումինեսցենտ գոռան հատապտուղ, բաժանված է մեծ քանակությամբ մանրադիտակային ծավալների (օրինակ՝ կաթիլների էմուլսիայում)։ PLR անցնելուց հետո վերլուծվում է, թե կաթիլների որ մասն է դրական ռեակցիա ունենում, և, ըստ ամենայնի, նկատվում է ֆլյուորեսցենտ։ Այս բաժինը համաչափ կլինի յուրաքանչյուր անհատի մոտ հայտնաբերված ԴՆԹ մոլեկուլների քանակին:

PLR հակադարձ տառադարձումից

PLR-ի այս կամ մեկ այլ տարբերակից առաջ արգելակվում է հակադարձ տրանսկրիպցիայի (ՌՆԹ-ից ԴՆԹ) ռեակցիան ռեվերտազ ֆերմենտի օգնությամբ։ Այսպիսով, այս մեթոդը թույլ է տալիս ճշգրիտ նույնականացնել ՌՆԹ մոլեկուլները: Սա կարող է օգտագործվել ՌՆԹ վիրուսները հայտնաբերելու կամ որոշակի գենի տրանսկրիպցիայի (mRNA) մակարդակը որոշելու համար։

Մալյունոկ 1. Etapi PLR. Այբբենարանները նշվում են կարմիր գույնով:

Մալյունոկ 2.ԴՆԹ-ի կրկնակի մոլեկուլների կուտակում՝ պրայմերներով շրջապատված, PLR-ի ժամանակ։

Մալյունոկ 3.Նմուշում հայտնաբերված ԴՆԹ մոլեկուլների տարբեր կոնցենտրացիաներում PLR ռեակցիայի դինամիկան: ա) – ամենաբարձր կոնցենտրացիան (բ) – միջանկյալ կոնցենտրացիան (գ) – ամենացածր կոնցենտրացիան

Մալյունոկ 4. PLR արտադրանքի ագարոզային էլեկտրոֆորեզ. K+ - դրական հսկողություն (հայտնաբերվող ԴՆԹ-ի առկայության հետևում): 1-7 - հետագա հետքեր (որից 1-2-ը դրական են, 3-7-ը` բացասական): K-բացասական վերահսկողություն (վիդեո ԴՆԹ սուկանա ԴՆԹ): Շատ դեպքերում, ի լրումն ամբողջ արտադրանքի, տեսանելի են ավելի շատ թեթև ոչ հատուկ ռեակցիայի արտադրանքներ (այբբենարանային դիմերներ):

Մալյունոկ 5.Մեթոդներ հայտնաբերման ժամը vikoristannya PLR ժամը. (ա) – intercalated barnberry – ֆլուորեսվում է, երբ կապված է կրկնակի շղթայական ԴՆԹ-ի հետ (b) – Taqman probe – ֆլյուորեսցենցիան տեղի է ունենում, երբ ԴՆԹ-ի զոնդը ճեղքվում է 5'-3' էնդոնուկլեազային ակտիվությամբ ԴՆԹ-ի պոլիմերազի կողմից՝ ֆլյուորեսցենտային մեմբրանի արատով և կրակմարիչով: (գ) – MolecularBeacon զոնդ – ֆլյուորեսցենցիան հայտնվում է զոնդի հիբրիդացման ժամանակ ամբողջ բեկորով հեռավոր ֆտորոֆորի և կրակմարիչի տարածությունից այն կողմ (դ) – LightCycler զոնդերը – ընդունողի ֆլյուորեսցենցիան հայտնվում է փոխանցված զոնդերի հիբրիդացման ժամանակ (FRET):

Պոլիմերազային շղթայական ռեակցիան (PLR, PCR) կենսաբանական նմուշից ԴՆԹ-ի բեկորների (գեների) անանուն պատճենները հեռացնելու մեթոդ է:

PLR-ի էությունը որպես մոլեկուլային կենսաբանության մեթոդի կայանում է երգի գենի (ԴՆԹ ընդլայնում) լայնածավալ օրինակի մեջ՝ ուղեղի հատուկ ֆերմենտների օգնությամբ։ արհեստական ​​պայմաններում. PLR-ի կարևոր հատկանիշը ԴՆԹ-ի կոնկրետ կտորի (գենի) պատճենի հեռացումն է, որը համապատասխանում է տվյալ մտքին: ԴՆԹ-ի պատճենման գործընթացի հոմանիշը «ուժեղացումն» է: ԴՆԹ-ի վերարտադրություն in vivoԿարող եք նաև օգտագործել ուժեղացում: Այնուամենայնիվ, կրկնօրինակման արդյունքում ԴՆԹ-ի կարճ հատվածները (առավելագույնը 40000 նուկլեոտիդային զույգ) ուժեղացվում են Lancug պոլիմերազային ռեակցիայի ժամանակ։

Հիմնական սկզբունքներ

Նաև PLR-ը ԴՆԹ-ի բեկորների կարբոնազային պատճենումն է in vitro ջերմաստիճանային ցիկլերի ընթացքում, որոնք կրկնվում են: Ինչպե՞ս է ռեակցիայի գործընթացը տեղի ունենում մեկ ջերմաստիճանի ցիկլի ընթացքում:

Նուկլեոտիդային նիզակի սինթեզն իրականացվում է ԴՆԹ պոլիմերազ ֆերմենտի միջոցով։ Սակայն, որպեսզի կոճը աշխատի, ֆերմենտին անհրաժեշտ է մեկնարկային հարթակ: Մայդանների նման, «պրայմերները» (սերմերը) գործում են որպես սինթետիկ օլիգոնուկլեոտիդներ՝ ընդհանուր 15-20 նուկլեոտիդներով։ Կան երկու այբբենարան (առաջ և հետադարձ), դրանք լրացնում են ԴՆԹ-ի կաղապարի հատվածները, և ԴՆԹ-ի բեկորն ինքնին, շրջապատված այբբենարաններով, պատճենվում է ԴՆԹ պոլիմերազով: Պոլիմերազի աշխատանքը կայանում է նրանում, որ ԴՆԹ-ի կաղապարի հաջորդականությանը լրացնող նուկլեոտիդների հաջորդական ավելացումն է։ Ինքը՝ Թիմը, մեկ ջերմաստիճանային ցիկլի ընթացքում կրկին սինթեզում է ԴՆԹ-ի երկու նոր բեկոր (քանի որ ԴՆԹ-ի մոլեկուլը Դոլանցյուժկովան է, ուրեմն կա երկու մատրիցա)։ Այսպիսով, 25-35 ցիկլերի ընթացքում նմուշը կուտակում է այբբենարանների կողմից հայտնաբերված ԴՆԹ-ի սյուժեի միլիարդավոր օրինակներ: Փակ ցիկլի կառուցվածքը կարող է ներկայացվել հետևյալ կերպ.

1. ԴՆԹ-ի դենատուրացիա (դՆԹ-ի նիզակների հալում, քայքայում) – 95°C – 1 կամ 2 հվիլին;
2. պրայմերների անկումը (այբբենարանները կապվում են ԴՆԹ-ի կաղապարին, այս փուլի ջերմաստիճանը որոշվում է այբբենարանի նուկլեոտիդային կազմով) - 60 ° C (օրինակ) - 1 hvilina;
3. ԴՆԹ-ի երկարացում (պոլիմերազը սինթեզում է ԴՆԹ) - 72°C - 1 ժամ (թողնել մեկ ժամ, մինչև բեկորը սինթեզվի)։

Լաբորատորիայում պոլիմերազային Lanziug ռեակցիայի մեթոդի փորձարկման գործնական հիմքը պետք է բաղկացած լինի.

1. (կամ էլ ինչ է կոչվում ջերմային ցիկլեր);
2. համակարգեր s-ի համար (PLR արդյունքների արտացոլման համար);
3. համակարգեր (PLR-ի արդյունքների վերլուծության համար);
4. (Նմուշի պատրաստման համար);
5. հավաքածու (մեխանիկական և էլեկտրոնային):

Բացի PLR լաբորատորիայի լիարժեք աշխատանքի համար հիմնական և օժանդակ սարքավորումներից, կան անհրաժեշտ նյութեր՝ ստերիլ ծայրեր, խողովակներ, խողովակների և դիսպենսերների դարակներ:

PLR-ի սկզբնական լաբորատորիայում ռեագենտի հիմքը լիարժեք պոլիմերազային Lancug ռեակցիան իրականացնելու համար ներառում է ԴՆԹ պոլիմերազ ֆերմենտը բուֆերով, պրայմերներ (դՆԹ-ի մատրիցի վերլուծված հատվածների ցողունին և ծայրին լրացնող փոքր սինթետիկ ԴՆԹ բեկորներ), գումարը. նուկլեոտիդներ (A, T, G, C): Բացարձակապես անհրաժեշտ է նաև մաքրված ջուրը։

PLR մեթոդի առավելությունները

Հետաքննության բարձր զգայունություն

Մեթոդի զգայունությունն այնպիսին է, որ PLR-ի ուժեղացում և թիրախային հաջորդականության նույնականացում կարելի է հասնել այն դեպքում, երբ այն տեղի է ունենում յուրաքանչյուր 5 բջիջը մեկ անգամ:

Վերլուծության առանձնահատկությունը

PLR-ն հնարավորություն է տալիս հայտնաբերել կոնկրետ վարակիչ նյութի ԴՆԹ-ն այլ միկրոօրգանիզմների ԴՆԹ-ի և ընդունող օրգանիզմի ԴՆԹ-ի առկայության դեպքում, ինչպես նաև իրականացնել գենոտիպավորում: Հատուկ ընտրելով ռեակցիայի բաղադրիչները (պրայմերները), դուք կարող եք ակնթարթորեն հայտնաբերել հարակից միկրոօրգանիզմների ԴՆԹ-ն:

PLR մեթոդի բազմակողմանիությունը

Աջ կողմում, մարդկանց ինֆեկցիոն և վարակիչ հիվանդությունների PLR ախտորոշման համար կարելի է օգտագործել նույն գիտելիքները, հետևել նմուշների (նմուշների) պատրաստման և վերլուծությունների կատարման ունիվերսալ ընթացակարգերին, ինչպես նաև ռեագենտների նմանատիպ հավաքածուներին:

Ժամանակի խնայողություն

PLR-ի կարևոր առավելությունը մշակութային մանրէաբանական աշխատանքի փուլերի քանակն է: Նմուշների պատրաստում, ռեակցիաների իրականացում և առավելագույն ռելիեֆի արդյունքների վերլուծություն և մեծ քանակությամբ ավտոմատացում: Ամեն դեպքում, արդյունքները կարող են արագ իջնել մինչև 4-5 տարի:

PLR մեթոդի արդյունավետությունը

Ուսումնասիրված կլինիկական նյութի լայնությունը

Պոլիմերազ Lanczyg ռեակցիայի արդյունքում հիվանդությունից կարող է հեռացվել ոչ միայն կենսաբանական նյութը, այլև շատ այլ սուբստրատներ, որոնցում ԴՆԹ-ի մոլեկուլները կարող են նույնականացվել բարձր հոգնածությամբ, օրինակ՝ ջուր, հող, սննդամթերք, միկրոօրգանիզմներ։ , և շատ ավելին:

Այս եզակի մեթոդի բոլոր կարևոր առավելություններն են՝ բարձր զգայունությունն ու յուրահատկությունը, վարակիչ գործակալի նույնականացումը և մարդու ցանկացած գենի գենոտիպավորումը, բարձր արդյունավետությունը և ժամանակի խնայողությունը, ունիվերսալ Գործնական հիմք չկա. ներկայիս PLR մեթոդը կարող է լայնորեն կիրառվել կլինիկական ախտորոշման մեջ։ , բժշկական պրակտիկա և գիտական ​​հետազոտություններ և հարստություն այլ ոլորտներում:

Zastosuvannya PLR

Մոլեկուլային կենսաբանության ներկայիս մեթոդի արդյունքում պոլիմերազային Լանկուգ ռեակցիայի լճացման տարածքները բազմազան են։ Այն հարուստ է վերլուծվող նյութի լայնությամբ (հետաքննության առարկա կարող է լինել գրեթե ամեն ինչ, որից կարելի է ավելի պարզ տեսնել ԴՆԹ-ն), ինչպես նաև ընտրված այբբենարանները։ PLR իրականացման հիմնական ոլորտները.

կլինիկական բժշկություն

• վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշում
• Ռեցեսիոն հիվանդությունների ախտորոշում
• հայտնաբերված մուտացիաներ
• գենոտիպը
• կլինիկական տեխնոլոգիաներ
• գենետիկական անձնագրերի ստեղծում

էկոլոգիա

• dovkilla-ի զարգացման մոնիտորինգ
• սննդամթերքի վերլուծություն
• գենետիկորեն ձևափոխված օրգանիզմների (ԳՁՕ) վերլուծություն

նավերի բժշկություն և դատաբժշկական փորձաքննություն

• Անհատական ​​նույնականացում
• Հայրենիքի ստեղծումը

դեղաբանություն

անասնաբուժական դեղորայք

գիտական ​​հետազոտություններ (մոլեկուլային կենսաբանություն, գենետիկա)

PLR լաբորատորիայի կազմակերպում

Տեղեկատվություն պայմանագրային պայմանագրի համար

Անուն	Մեր մասին	Վիրոբնիցվո	Մեթոդ	Cat.No.

PLR - վարակների ախտորոշում, տարբեր վարակիչ հիվանդությունների հայտնաբերման անմիջական և բարձր ճշգրտության մեթոդ: Ո՞րն է տարբերությունը այլ վերլուծությունների միջև:

Այս հապավումը վերծանվում է որպես պոլիմերազային Lanzug ռեակցիա: Ըստ Վիքիպեդիայի՝ Քերի Մալիսը ծնվել է 1983 թվականին, ամերիկյան պատմություն։ Իր ներդրման համար նրան մերժեցին Նոբելյան մրցանակը։

Վերջին անգամ PLR-ը հաղթեց միայն գիտական ​​մեթոդով, որից հետո այն հաջողությամբ հաստատվեց բժշկության կողմից։ Հետաքննության էությունը ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի հիման վրա վարակիչ գործակալի ճանաչման մեջ է: Մաշկի հիվանդությունը, թափանցելով ԴՆԹ, փոխում է իր կառուցվածքը իր տարբեր տեսակի։ Փոփոխված ԴՆԹ-ն տեսնելով՝ լաբորանտը գիտակցում է, թե ինչպես է հիվանդությունը առաջանում մարդկանց մոտ: PLR-ի այլ առավելությունների թվում.

1. ԴՆԹ-ում «հետքը» կորցրած վարակի առաջնային պատճառի բացահայտում: Երբ հայտնաբերվում են բազմաթիվ հիվանդություններ, կարևոր է բացահայտել այն հիվանդությունները, որտեղից ամեն ինչ սկսվել է: Իսկ ճիշտ ախտորոշման և արդյունավետ բուժման ընտրության համար ահռելի նշանակություն ունի Լանցուգի ռեակցիան.
2. Այն տեղադրվում է PLR-ի վրա, քանի որ ԴՆԹ-ն փոխվել է և փոխակերպման որոշակի փուլում: Սա անհրաժեշտ է կասկածելի վարակները բացառելու համար.
3. PLR ախտորոշումը զգայուն է և հայտնաբերում է առանձին բակտերիաների և վիրուսների առկայությունը: Սխալ նշանակված լոգանքից կամ լոգանքի չնախատեսված ընդհատումից հետո արյան մեջ հոտը կարող է կորցնել: PLR-ի վերծանման ժամանակ ախտորոշված ​​նվազագույն քանակը 10 հաճախորդի օր է: Փորձարկման այլ մեթոդներ ավելի փոքր են.
4. Պաթոգեն միկրոօրգանիզմները հայտնաբերվում են կախված PPSS- ի ախտանիշների դրսևորումից: Վաղ փուլում հայտնաբերված հիվանդությունը չի տևում այնքան երկար, որքան խորացված ձևը.
5. Հիվանդությունների PLR-ի արդյունքները ձեռքի տակ կառնվեն այն արագ ավարտելու համար։ Ինֆեկցիաները ախտորոշելու համար 4-6 տարուց մի փոքր ավելի է պահանջվում։ Ապակոդավորման հետ մեկտեղ ամբողջ գործընթացը տևում է 1-2 օրից մի փոքր ավելի;
6. Մի ժամանակ ԴՆԹ-ի նյութը արդյունահանվում է 5-6 թեստ անցկացնելու համար։ Հիվանդ մարդը բազմիցս քսուք անցնելու հնարավորություն չի ունենա.
7. PLR-ը և վարակների հետագծումը դեռ չեն կանգնում, այս տարածքը կայուն զարգանում է: Զգայունությամբ նոր թեստային համակարգերի հայտնաբերման հետ մեկտեղ հետևելու հավանականությունը նվազում է: Քանի որ նախկինում այն ​​հասանելի էր միայն մեգապոլիսների բնակիչներին, այժմ մարզերի հիվանդանոցային կլինիկաների բժիշկները չեն պատկերացնում առանց դրա հիվանդությունների բուժումը։

PLR մեթոդի առանձնահատկությունները.

1. Ճշգրտություն (ուղղումները նվազագույն են, և դրանց հաճախականությունը չի գերազանցում 0,01%);
2. Զգայունություն (թեստը «հաշվում է» արյան և քսուքների առանձին բակտերիաները);
3. Կոնկրետություն (PLR-ն հայտնաբերում է վարակներ, որոնք հաճախ չեն արտահայտվում մինչև կարևոր փուլ);
4. Եզակիություն (արդյունքների վերլուծություն այն իրավիճակներում, երբ այլ հետազոտությունները ոչինչ չեն բացահայտում):

PLR վերլուծության արդյունքները

Ինչպե՞ս է աշխատում Lanzug-ի ռեակցիայի մեթոդը և ինչպես եք պատրաստվում նախքան վերլուծությունը:

Լանցուգի ռեակցիան լաբորատոր ուղեղներում փոխանցում է հարուստ ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի սյուժեների բազմապատկումը՝ նույնականացնելով նույն վնասված հատվածը: Ֆերմենտային պատրաստուկների օգնությամբ թթուները ուժեղացվում են (խոնարհվում)։ Օգտագործելով վիկորիստիկ ֆերմենտներ, լաբորանտը հեռացնում է պաթոգեն ԴՆԹ-ի բեկորների բավարար պատճենները՝ PLR-ը համապատասխանեցնելու այս և վարակի հետևանքով առաջացած այլ հիվանդությունների ախտանիշներին:

Որպես կանոն, փորձարկվում են նմուշառմամբ կամ քսուքով վերցված կենսաբանական նյութերը։ Նույնականացման (սեռավարակների վերծանման) համար վերցվում է քսուք էպիդերմիսից, արգանդի վզից կամ արգանդից PLR-ի համար: Երբեմն կռվում են նաև վիկորիստները։

Հեպատիտի, տոքսոպլազմոզի կամ ՄԻԱՎ-ի առկայությունը հաստատելու կամ հայտնաբերելու համար արյուն վերցրեք երակից: Մատից վերցված արյունը հաճախ կաթի նկատմամբ բացասական արդյունք է տալիս։ Մոնոնուկլեոզը ախտորոշվում է ջորի կոկորդի նյութը հավաքելուց հետո: Տուբերկուլյոզը կարող է հայտնաբերվել խորխի հավաքումից հետո, ինչպես պարզ երևում է վերքերով հիվանդների մոտ։

Արգանդի և արգանդի վզիկի քսուքը PLR-ի համար պարզ վերլուծություն է, դրա հետ հիմարություն չկա: Միջոցառումից 2-3 օր առաջ ձեզ կխրախուսեն պաշտոնական կյանքով ապրել: Մեր օրերում բնական հիմքով գելերն ու կաթն օգտագործվում են հատուկ հիգիենայի համար։ Ծորակից կարող եք տաք ջուր խմել։ Դադարեցրեք լվացումը - երեկո վերքը լաբորատորիա կամ բժշկի գրասենյակ:

Կարևոր է նաև կեռնեխի բուժումը քսուքների, քսուքների, մոմերի և սփրեյների միջոցով, որն իրականացվում է։ Առաջին կոնքի վրա քսուք են վերցվում դաշտանից հետո կամ անմիջապես հետո: Ճշգրիտ արդյունքներ ստանալու համար խորհուրդ է տրվում չգնալ զուգարան 2-3 տարի՝ նախքան PLR քսուք հավաքելը։

Մարդկանց մոտ, ովքեր ունեն Lanziug ռեակցիա, շվաբր են վերցվում միզուկից: Կենսաբանական նյութը հավաքվում է ստերիլ զոնդի կամ բամբակյա շվաբրի միջոցով, որը ներմուծվում է սերմի մեջ: Պրոցեդուրայի մեկ ժամվա ընթացքում դուք կարող եք զգալ թեթև անհանգստություն կամ լյարդի այտուց: Մարդիկ նույնպես պետք է շատ ժամանակ ծախսեն սեքսի և հիգիենայի մասին սովորելու համար: Նշանակվում է անալիզից առաջ ընկած ժամանակահատվածը, հակաբիոտիկներով և այլ դեղամիջոցներով բուժումը: Եթե ​​հավաքածուից հետո անհարմարությունը պահպանվում է, ապա խորհուրդ է տրվում հնարավորինս շուտ գնալ կլինիկա:

Ընդունելի է, որ հիվանդն անցնի արյան անալիզ կամ հիվանդի օրգաններից վերցված քսուք։ Գենետիկ նյութը տեղադրվում է PLR ուժեղացման սարքի մեջ, և այնտեղ ավելացվում են ֆերմենտներ։ ԴՆԹ-ն տաքացվում է մինչև 90-95 ° C, մինչև շամփուրը ձևավորվի: Այս գործընթացը կոչվում է denaturation: Ռեակտորի աշխատանքի մեկ ժամվա ընթացքում ԴՆԹ-ի և ՌՆԹ-ի մեկ նմուշից ստեղծվում են հազարավոր օրինակներ՝ անալիզի համար (ռեակցիան վերծանելու համար)։

PLR-ի ախտորոշման արդյունքները

Lanzug-ի ռեակցիան ցույց է տալիս վարակի ծանրությունը և կոնկրետ ակնհայտ բարդությունների քանակը: Մնացած ժայռերի բացահայտումը մարդու ԴՆԹ-ում մուտացիոն գեների անհատական ​​ներմուծումն է՝ գենոտիպը փոխելու կարողությունը բացահայտելու նպատակով:

Ի՞նչ է բացահայտում PPR վարակի ախտորոշումը:

Անալիզի արդյունքների վերծանումը հստակ տեսանելի է որակավորված բժշկին: Lanczyg ռեակցիայի ուժը թույլ է տալիս մեզ հաստատել կամ հայտնաբերել նման հիվանդությունների առկայությունը.

Ինչպես պարզ է այս ցանկից, PLR ախտորոշումը բժիշկներին տրամադրում է բարձր մասնագիտացված մասնագիտությունների լայն տեսականի՝ առանց սահմանափակ հնարավորությունների: Մեթոդը կարող է կիրառվել թոքաբանության, վիրուսաբանության, ինֆեկցիոն հիվանդությունների, ուռուցքաբանության, գաստրոէնտերոլոգիայի, արյունաբանության, գինեկոլոգիայի և ուրոլոգիայի ոլորտներում։

PLR ապակոդավորում. արդյունքներ

Լանկուգի ռեակցիայի վերլուծությունները բժիշկների կողմից անհատապես գնահատվում են ակնհայտ պաթոլոգիաներով և քրոնիկական հիվանդություններով մաշկային հիվանդի համար: PLR-ի վերլուծությունների արդյունքները ցույց են տալիս, ինչպես արդեն նշվեց վերևում, պաթոգեն բակտերիաների առանձնահատկությունները: Դրանց հետ վարվելիս բժիշկը սահմանում է հիվանդության ծանրության և փուլը։ Այս ցուցանիշների հիման վրա հետագա ցուցված են դեղերի չափաբաժինը և բուժման կուրսի տևողությունը։

PLR-ի բացասական արդյունքը նշանակում է, որ հավաքված կենսաբանական նյութը ամեն օր ցուցադրում է ցանկացած վիրուս կամ վարակ: Դրական PLR-ն ազդանշան է ահազանգից առաջ: Նաև հիվանդի արյան մեջ և այլ կենսաբանական հատվածներում վարակ է հայտնաբերվել։

Եթե ​​արժեքները նվազագույն են, կարելի է խոսել հիվանդության պարզ առկայության մասին, այլ ոչ միայն հիվանդության ակտիվ զարգացման մասին։ Վարակի պարզ կրողին, որը միայն դրսևորվում է PPR-ով, բայց չի ցուցաբերում սովորական այլ ախտանիշներ, պետք է մշտապես խորհրդակցի բժշկի հետ:

Կարևոր է խուճապի չմատնվել և հիշել, որ գիտությանը հայտնի վիրուսների մեծ մասը կարելի է բուժել հակաբակտերիալ դեղամիջոցներով: Դրանց ընտրությունը և անարդյունավետության դեպքում մեկը մեկով փոխարինելը կարող է զրկել բժշկի որակավորումից, ինչի մասին է վկայում այս և այլ հիվանդությունների բուժումը։

PLR-ի վերծանումը կարող է իրականացվել ոչ միայն բժշկի հայեցողությամբ, այլև իշխանությունների հայեցողությամբ: Հաճախ մենք վախենում ենք այն կանանցից, ովքեր պլանավորում են մոտ ապագայում հղիանալ, որպեսզի խուսափեն սեռական ճանապարհով փոխանցվող հիվանդությունների հավանականությունից։ Հիվանդի հետ տարածաշրջանային կոնսուլտացիայի ժամանակ տեղավորվելիս մանրակրկիտ ախտորոշման կարիք չկա:

PLR-ը նշանակվում է պարտադիր կանանց համար, ովքեր փոքրաթիվ աբորտներ են արել կամ տարբեր պատճառներով աբորտներ արել։ Մինչ EBC-ն վերլուծություն է կատարվում՝ բացահայտելու բեղմնավորված ձվի հնարավոր արտաքսման բոլոր պատճառները։

Մարդիկ հաճախ PLR են իրականացնում ազատ արձակվելուց հետո, ինչ-որ տոնական սիրավեպի կամ հարսանիքի ժամին: Դիագնոստիկան օգնում է նրանց չվտանգել իրենց կյանքը և պոտենցիալ սեռական գործընկերների առողջությունը:

Հաճախ PLR-ը հիվանդի համար սաղմնային փուլում հիվանդությունից ապաքինվելու միակ հնարավորությունն է, եթե անհարկի ռիսկը բարդանում է դժվար ճանապարհով:

Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման համար PLR մեթոդով քսելը կարող է ավելի կարևոր դառնալ.

• Վարակիչ հիվանդությունների և հիվանդությունների ուղղակի ախտորոշում.

Լաբորատոր ախտորոշման շատ ավանդական մեթոդներ հիմնված են տարբեր անուղղակի նշանների համար ամենօրյա հիվանդության հայտնաբերման վրա: Օրինակ, ELISA ախտորոշումը հիմնված է հիվանդի արյան մեջ հայտնաբերված սպիտակուցների վրա, որոնք վարակիչ նյութերի քայքայման արտադրանք են, որոնց հիման վրա բժիշկը կարող է այլ ախտորոշում կատարել: PLR վերլուծության մեթոդը ուղիղ նշում է հիվանդից վերցված նյութում հիվանդության հատուկ ԴՆԹ նմուշի առկայության մասին:

• PLR ախտորոշման բարձր առանձնահատկություն:

Վերլուծության ընթացքում հետազոտված նյութը բացահայտում է ԴՆԹ-ի մի հատված, որը հատուկ է և ուժ ունի որոշակի օրգանիզմի համար՝ կա՛մ բակտերիա, կա՛մ վիրուս: ԴՆԹ-ի այս կտորը եզակի է և բնորոշ չէ երկրագնդի վրա կենդանիների վարակմանը:

• PLR-ի բարձր զգայունություն:

Վարակները կարող են առաջանալ, եթե հիվանդից վերցված նյութը պարունակում է մեկից պակաս բակտերիա կամ վիրուս: Համեմատելի է այլ իմունոլոգիական և մանրէաբանական ախտորոշման մեթոդների հետ. PLR վերլուծության զգայունություն՝ 10-100 բջիջ մեկ նմուշում, այլ մեթոդներ՝ 103-105 բջիջ:

0Զանգված (=> վերլուծում է) զանգված (=> 2) զանգված (=>.html) 2

• PLR վերլուծության բազմակողմանիությունը.

PLR հետազոտության համար հնարավոր է օգտագործել գործնականում ցանկացած նյութ, որը հասանելի չէ այլ մեթոդներով հետազոտման համար՝ լորձ, հատումներ, արյուն, շիճուկ, խորք, սերմնաժայթքվածք, էպիթելային բջիջների քերծվածքներ՝ բեկորներ և այլն: Վարակը կարող է առաջանալ ցանկացած կենսաբանական վիճակում: նյութեր կամ հյուսվածքներ.

• PLR վերլուծության արդյունքներին աջակցության բարձր աստիճան կա:

Անալիզի համար հիվանդից վերցված նյութի ամբողջ մշակման միասնական մեթոդը, ռեակցիայի արտադրանքի հայտնաբերումը, PLR ավտոմատացված ուժեղացումը թույլ է տալիս նոր PLR ախտորոշում կատարել 4-5 տարում: Միևնույն ժամանակ, մեկ ժամից շատ ավելին է ծախսվում դիտարկման մշակութային մեթոդների վրա՝ շատ օրերից մինչև շատ օրեր, քանի որ անհրաժեշտ է տեսնել, այնուհետև զարգացնել պաթոգենը բջջային մշակույթի վրա:

• Ցանկացած տեսակի վարակի ախտորոշման հնարավորություն։

PLR մեթոդի բարձր զգայունությունը հնարավորություն է տալիս ախտորոշել վարակը ոչ միայն հիվանդության սուր փուլում, այլ նաև հայտնաբերել քրոնիկական վարակները և բացահայտել առանձին բակտերիաներ և վիրուսներ:

PLR մեթոդով քսուքը հնարավորություն է տալիս հայտնաբերել վարակներ, որոնք հնարավոր չէ հայտնաբերել ֆլորայի քսուքով` քլամիդիա, ուրեապլազմոզ, միկոպլազմոզ, սեռական հերպես:

Որո՞նք են հետաքննության մեթոդի և PLR ախտորոշման նշանակալի առավելությունները: PLR ախտորոշման թերությունները ներառում են.

• Դրական արդյունք ստանալու հնարավորություն

PLR վերլուծությունը կարող է դրական արդյունք ցույց տալ, եթե վարակն արդեն մեռած է, «սպանված» է հակաբիոտիկներով, իսկ մահացած բջիջները դեռ գտնվում են հիվանդի հյուսվածքներում: Ինչպես է դա հնարավոր? Շատ պարզ. Օրինակ, վարակը ապրում է էպիթելի հյուսվածքներում (օրգանների կամ աչքերի լորձաթաղանթի վրա): Նրանք երկուսն էլ վայելեցին դա։ Բջիջների էպիթելը «թարմացնելու» համար պահանջվում է մեկ ժամ։ Եթե ​​նյութը բժիշկը վերցնում է նախքան բջիջների ամբողջական նորացումը, նյութը կարող է պարունակել վարակի մահացած բջիջներ: Կլիտինին, ակնհայտորեն, հեռացնում է գենետիկական նյութը՝ մարմնի ԴՆԹ-ն կամ ՌՆԹ-ն, ինչն էլ մտածում է PLR-ը: PLR-ը չի առանձնացնում մահացած բջիջները կենդանիներից. այն փնտրում է ԴՆԹ և «կլոնավորում» դրանք մեծ քանակությամբ: Նման վերլուծության արդյունքը դրական է։ Փաստորեն, ճիշտ է, որ մենք հիբնոպոզիտիվ ենք։

PLR-ի անկարողությունը «վերականգնել» մահացած վարակը կենդանի մարդուց, դժվարացնում է PLR-ի հայտնաբերումը և բուժման արդյունավետությունը վերահսկելը: Հիմնական կանոնը, իհարկե, ապահովելն է, որ վարակի մեռած ավելցուկները լիովին հեռացվեն մարմնից, որը միջինում գոյատևում է 4-8 տարի։ Հետևաբար, մնացած հակաբիոտիկ հաբերն ընդունելուց հետո PLR մեթոդը կարող է և պետք է օգտագործվի բուժման արդյունավետությունը վերահսկելու համար:

գաստրոէնտերոլոգիա ախտորոշիչ համալիր `5360 ռուբլի

TILKI IN BEREZNY խնայողություն - 15%

1000 ռուբլի ԷՍԳ-ի դուրսբերում վերծանումից

- 25%առաջնային
տեսնել բժշկին
թերապևտ հանգստյան օրերին

980 ռուբ. առաջին հանդիպում հիռուդոթերապևտի հետ

նշանակում թերապևտի հետ - 1130 ռուբլի (այլընտրանքային 1500 ռուբլի) «Միայն շաբաթվա ընթացքում, շաբաթ օրերին և շաբաթներին, թերապևտի այցը 25% զեղչով` 1130 ռուբլի, 1500 ռուբլու փոխարեն (ախտորոշիչ ընթացակարգերը վճարվում են ըստ գնացուցակի)

Հետագա փուլում արգելման վերահսկումը կարող է իրականացվել մշակութային այլ եղանակով կամ ցանքով. միայն բազմացող կենդանի միկրոօրգանիզմները կարող են ծառայել որպես ոչ բռնության նշան:

• Գարդներելլոզը ախտորոշելու համար նպատակահարմար չէ օգտագործել PLR անալիզը, քանի որ gardnerelli-ն՝ այս հիվանդությամբ տառապողները, փոքր թվով դեպքերում, սովորաբար ապրում են հողում: Վիկորիստիկ PLR-ով այս բակտերիաների ԴՆԹ-ն շուտով կկորչի: Գարդներելլան չի երևում քսուքի մեջ, և բակտերիոսկոպիան այս դեպքում բավարար մեթոդ է գարդներելլոզի ախտորոշման և բուժման մոնիտորինգի համար:
• Միկրոօրգանիզմների բազմազանություն

Ցանկացած մանրէ կարող է փոխվել, և միևնույն ժամանակ, ինչպես ԴՆԹ-ն: Այս գալուսի ամենագեղեցիկ հետույքը գրիպի վիրուսն է: Մեկ անգամ հիվանդանալով՝ մարդը վիրուսի դեմ հակամարմիններ է զարգացնում։ Զուտ տեսականորեն, եթե մենք գրիպով հիվանդացել ենք թեկուզ մեկ անգամ, ապա, ինչպես գրիպով, մենք մեղավոր չենք, որ նորից հիվանդանալու ենք։ Համարյա կոկորդի ցավ ունենք։ Ինչն է պատճառը? Վիրուսը «մուտացիայի է ենթարկվում»՝ մի փոքր «փոխելով» իր գենոմը, իսկ մեր իմունային համակարգը, մեր հակամարմիններն այլևս չեն «ճանաչում» հին հյուրին նոր տեսքով։ Խենթություն չէ, որ ես նորից հիվանդանում եմ գրիպով…

Ուժեղացուցիչ (PLR թեստային համակարգ) նախագծելիս ընտրվում է տվյալ միկրոօրգանիզմին հատուկ ԴՆԹ-ի հատված, որն ամենաքիչն է ենթակա փոփոխության: Այն «ընտրված է» ԴՆԹ-ի այսպես կոչված խիստ պահպանողական հատվածից։ Որպես այլընտրանք, միկրոօրգանիզմների առատությունը կարող է հանգեցնել նրան, որ դիտարկվող օրգանիզմի որոշ գենոտիպեր կամ շտամներ կարող են առաջացնել մուտացիաներ գենոմում, որն ուժեղանում է (կլոնավորում) և այդպիսով դառնում է անորոշ, որը տրված է թեստային համակարգով:

Այսպիսով, տարբեր թեստային համակարգերը պատճառներից մեկն են, թե ինչու տարբեր լաբորատորիաներում և տարբեր կլինիկաներում նույն PLR մեթոդով կատարված վերլուծությունները կարող են տրամագծորեն տարբեր արդյունքներ ցույց տալ: Մուտացիաներից հնարավորինս խուսափելու համար այժմ մշակվել են ստանդարտներ՝ կարգավորելու փորձարկումները (ներառյալ խաչաձև ռեակցիայի թեստը, ինչպես նաև նշված կենցաղային շտամների փորձարկումը), որը պահանջում է թեստավորման համակարգ, առաջինը շուկա դուրս գալու համար և Արդյո՞ք Vicoristan-ը կօգտագործվի ձեր առողջությունը ախտորոշելու համար Ինչո՞ւ են լավ կլինիկաներն ու լաբորատորիաներն օգտագործում Vicoristan-ը թեստային համակարգերի մնացած սերունդների համար: Իսկ մեր «Եվրոմեդպրեստիժ» բժշկական կենտրոնը այն քչերից է, որը կարող է իր հաճախորդներին տրամադրել հստակ ախտորոշում: