Gołowna Objawy Jak przeprowadzić diagnostykę PCR Analiza metodą PCR. Wysoka czułość badania

Jak przeprowadzić diagnostykę PCR Analiza metodą PCR. Wysoka czułość badania

PLR (reakcja polimerazy Lanzuga) to osiągnięcie biologii molekularnej, jedna z głównych metod klinicznej diagnostyki laboratoryjnej końca XX i początku XXI wieku, które przynosi ogromne szkody różnym pacjentom nauk medycznych.

W ten sposób, jak w środku milionów komórek ludzkiego ciała, nie ulega zniszczeniu sam żywy wirus, a jedynie część jego DNA, wówczas PLR, bo nie da się mu zaprzątać, może próbować poinformować o obecności „obcego” z wynikiem pozytywnym. Istotą PLR jest jego główna zaleta.

Nawilżenie i braki

Laboratorium wykonujące diagnostykę PLR ma duże zapotrzebowanie na dostępność systemów badawczych i kwalifikacje personelu medycznego. Jest to laboratorium high-tech, posiadające dobrze uporządkowany arsenał bardzo czułych i wysoce specyficznych odczynników, dzięki czemu nie ma specjalnych niedoborów. Wszystko, co daje pozytywny wynik przy braku objawów klinicznych i tym samym stawia lekarza przed dylematem: rozpocząć leczenie czy nie?

Lekarz opiekujący się pacjentem zaczyna wątpić w wiarygodność wyników badań, o ile nie występują objawy choroby. Jednak wysoka czułość systemu PLR opiera się na pamięci, że już na etapie przedklinicznym ujawnia on pobudkę, a pozytywny wynik w tym przypadku następuje wcześniej niż po roku, a nie na dłuższą metę. Na tej podstawie lekarz jest odpowiedzialny za samodzielne podejmowanie decyzji o przydatności terapii, biorąc pod uwagę pozostałe argumenty „za” i „przeciw”.

Zalety diagnostyki z wykorzystaniem reakcji polimerazy Lanziuga są oczywiste:

Wysoka specyficzność, które osiąga 100%, wynika z obecności w próbce cząstek kwasów nukleinowych, które są silne w danym organizmie lub obce dla człowieka;
Wysoka wydajność, a nawet PLR to zaawansowana technologicznie, zautomatyzowana technika, która umożliwia przeprowadzenie badania w dniu pobrania materiału i rutynowe leczenie pacjenta w przypadku jakichkolwiek niepokojów;
PLR pracując nad jedną awarią może przeprowadzić serię badań dot ujawnić kilka świąt jakby była takim skarbem. Na przykład podczas diagnozowania infekcji chlamydiami, gdy PLR stosuje się do głównych metod, w celu wykrycia chlamydii, można wykryć Neissera (rzeżączkę) - alarmistę. Ponadto nie ma negatywnego wpływu na wiarygodność wyników;
Badanie metodą PLR ujawnia niebezpieczne mikroorganizmy w okresie inkubacji Jeśli choroba nie osiągnęła jeszcze końca organizmu, wczesna diagnoza przewiduje przyszły rozwój procesu patologicznego, co pozwala przygotować się na coś nowego i zaakceptować to od całości.

Dodatkowo, aby wyeliminować zamieszanie, jakie czasami pojawia się w trakcie diagnozy, PLR zabezpiecza się także tym, że jej wyniki można utrwalać (fotograficznie, komputerowo) metodą ich korygowania eksperckiego dla celów, które mogą być konieczne.

Normą w typach PLR jest wycena wyników ujemnych, co wskazuje na obecność fragmentów obcych kwasów nukleinowych, dowód pozytywny wskazuje na obecność infekcji w organizmie, wartości cyfrowe wskazują na siłę wirusa i jego stężenie w momencie badania. Proteo zewnętrznie rozszyfrował analizę tego lekarza, który przeprowadził specjalne badanie na temat „PLR”. Nie ma sensu próbować samodzielnie interpretować wyników, bo można, gdy tylko wszystko się wydarzy, źle zrozumieć i zacząć się przechwalać.

Czego boi się PLR, co może zrobić i jak możemy się na to przygotować?

Jak każde inne śledztwo, Czasami wyniki testu są albo pozytywne, albo negatywne, de PLR nie jest winien. W takich sytuacjach mogą wystąpić następujące zdarzenia:

Zakłócenie procesu technologicznego na jednym z etapów reakcji;
Zasady Nedotrimannya dotyczące gromadzenia materiału, jego konserwacji i transportu;
Obecność elementów obcych w materiale.

Oznacza to, że przed PLR – diagnostyką infekcji należy podejść do niej z szacunkiem, ostrożnością i dokładnością, w przeciwnym razie materiał może zmienić swoją strukturę lub całkowicie się zawalić.

Etapy diagnostyki PLR. Wyniki Milkova mogą zostać zakłócone na każdym etapie śledztwa.

Diagnostyka PLR infekcji zalicza się do kategorii „złotych standardów” wśród innych metod laboratoryjnych, dzięki czemu można ją stosować do wykrywania codziennych schorzeń, które na pierwszy rzut oka nie wskazują na nic poważnego:

Gruźlica o różnej lokalizacji, zapalenie płuc (w tym atypowe zapalenie płuc wywołane przez chlamydię);
Infekcje w dzieciństwie (różyczka krowia, świnka, ćwierkanie);
Błonica;
Salmonella;
Zoonotyczna choroba zakaźna – listerioza (choroba charakteryzuje się różnorodnymi objawami na skutek uszkodzenia węzłów chłonnych, centralnego układu nerwowego, narządów wewnętrznych);
Choroba wywołana wirusem Epsteina-Barra (mononukleoza zakaźna itp.);
Patologia onkologiczna wywołana infekcją wirusem brodawczaka (IDP tego typu);
Borelioza (borelioza, kleszczowe zapalenie mózgu);
Zakażenie Helicobacter pylori, wywołane przez drobnoustrój Helicobacter pylori, który żyje w sromie danej osoby. Udowodniono, że Helicobacter pylori powoduje rozwój raka tarczy lub 12-cyfrowej okrężnicy;
i praktycznie wszystko.

Diagnostyka PLR infekcji przenoszonych przez choroby jest szczególnie ważna, gdy choroby, które się w ten sposób pojawiają, często przechodzą przez długi czas bez żadnych objawów klinicznych, ale następnie zaczynają się uaktywniać, gdy chory kręci się i w ten sposób zagrażać zdrowiu i życiu dziecka. Użyj i w ten sam sposób. Działania z nich („pochodnia”) są ustalane natychmiast i do ІПШ, reszta wymaga rozpatrzenia raportu. Więcej o najpopularniejszych metodach dowiesz się z dalszej części artykułu.

Jak się prawidłowo przygotować, aby uzyskać wiarygodny wynik?

Należy pamiętać, że przygotowanie do PLR jest proste i nie wymaga specjalnego wysiłku ze strony pacjenta. Konieczne jest podpisanie trzech niezręcznych zadań:

Nie kontaktuj się z artykułem 24 lata przed datą analizy;
Aby pobrać i zbadać krew z żyły, należy przypłynąć do łodzi na czczo, ale nie można pić, dopóki się nie odezwie;
Daj mi to jak najszybciej (w sterylnym słoiczku, postawionym przed apteką).

PLR można przeprowadzić w dowolnym środowisku biologicznym

Metoda PLR nie zakłóca „krwiożerczości”; wykorzystuje pożywkę biologiczną, aby zapobiec przenoszeniu czynników zakaźnych. wybierz – to, co należy zabrać do dalszych badań, zostanie przesłane do lekarza.

W ten sposób w poszukiwaniu alarmu, oprócz analizy krwi (choć możemy też podejść i w większości przypadków postępować równolegle z innym materiałem), możemy vikorize:

(Widzenie układu moczowo-płciowego);
skrawek błony śluzowej jamy ustnej, spojówki, nosogardzieli i tętnic (u kobiet pobierz z szyjki macicy i mięśni, u mężczyzn z cewki moczowej);
Slinu;
Sperma;
z przedniej winorośli;
Tkanka łożyskowa i płyn owodniowy (płyn owodniowy);
Sedymentacja (po odwirowaniu), na przykład w celu identyfikacji typów IPSS i prątków gruźlicy;
plwocina i płyn opłucnowy z tą samą substancją;
wysięk;
Rdzeń kręgowy, jeśli istnieje podejrzenie zakaźnego uszkodzenia ośrodkowego układu nerwowego;
Materiał biopsyjny (bioptat) pobrany z wątroby, jelita 12-pazurowego, łuski itp.

Przed powyższym dodam, że materiał do badań we wszystkich przypadkach, w zeskrobinach i obserwacjach będzie wystarczający, niektóre badania metodą PLR nie wymagają dużego wysiłku, analiza ogranicza się do wiele Mikrolitrów należy pobrać z mikroprobówki typu ependorf i przesłać do Vivchennia.

Choroba i stagnacja PLR

Reakcja VIL i polimerazy Lanzuga

Jeżeli poddasz się anonimowym badaniom i uzyskasz wynik pozytywny, diagnostykę immunoblotową należy powtórzyć jeszcze raz. Po potwierdzeniu diagnozy pacjentowi przepisuje się dodatkowe badania:

Na podstawie dodatkowych reakcji immunologicznych określa się wartości bezwzględne liczby limfocytów CD 4 (komórki immunokompetentne – komórki pomocnicze T lub komórki nerek), które infekcja atakuje nas jako pierwsze, po czym tracą swoje, a główne władze nie mogą ich zniszczyć. swoje” i cudze”. Wirus RNA krążący w osoczu krwi jest mylony z normalnymi komórkami organizmu i nie reaguje na nie;
Wykrywanie wirusa RNA metodą PLR i rozkład stężenia cząstek wirusa na podstawie stadium, ciężkości procesu patologicznego i rokowania na podstawie bilansu tych danych. Oczywiście w planie brakuje słowa „norma”, dlatego reakcja jest zawsze pozytywna, a rozszyfrowanie wartości cyfrowych należy do kompetencji lekarza.

PLR i zapalenie wątroby

Metodą PLR można wykryć zapalenie wątroby, najczęściej test służy do diagnozowania zapalenia wątroby, które innymi metodami jest słabo diagnozowane.

Za jego zachowanie w organizmie człowieka odpowiada wirus zapalenia wątroby typu C (RNA). Uwięziony w genomie komórek wątroby (hepatocytów) przebywa tam we właściwym czasie, który może nadejść za 2 lub 20 lat, dlatego lekarze nazywają go „martwym zabójcą”. Wirusowe zapalenie wątroby typu C prowadzi do rozwoju procesu złośliwego w miąższu wątroby, który objawia się w późniejszych stadiach. Układ odpornościowy tego wszystkiego nie zaznacza, myląc wirusa z hepatocytem. Jednak w wielu przypadkach powstają przeciwciała przeciwko wirusowi, które nie chronią zdrowego układu odpornościowego. Do diagnozowania testu ELISA na wirusowe zapalenie wątroby typu C nie jest to zbyt pouczające, ponieważ wskazuje, że wirus utracił ślady i nie wiadomo, czy sam jest zakażony. W przypadku zakażenia HCV następuje samoistne wymieranie, gdyż przeciwciała przeciwko wirusowi zanikają i krążą w nieskończoność (pamięć immunologiczna). PLR znacząco poprzedza powstawanie przeciwciał i może wykryć cząstkę wirusa już 1-1,5 dnia, natomiast AT może pojawiać się w odstępach 2 miesięcy przed porodem.

Diagnostyka PLR w przypadku podejrzenia rozprzestrzenienia się wirusa zapalenia wątroby typu C w organizmie człowieka jest najbardziej optymalną metodą badawczą, gdyż jedynie we krwi lub biopsji wątroby pacjenta możliwe jest stwierdzenie obecności „legalnego wroga” .

Czasami jednak może wystąpić napad, jeśli AT jest dodatni, a wynik PLR jest ujemny. Metodę tę stosuje się, gdy wirus ma bardzo małą intensywność lub gdy „w uśpieniu” przedostaje się do wątroby, nie przedostając się do krwioobiegu. Aby poznać prawdę, pobiera się od pacjenta powtórną analizę, a nawet więcej niż jedną.

Zakażenie wirusem brodawczaka

Ponieważ nie jest możliwe samozarażenie się, możliwe jest też, nie ujawniając niczego, utrzymywanie się przez długi czas w ciele władcy, którego co do ceny nie podejrzewam, gdyż fragmenty PLR nie były rozwinęła się, a objawy choroby występowały codziennie. Jednakże obecność wirusa brodawczaka, zarówno utajonego, jak i utajonego, nie jest korzystna dla zdrowia danej osoby, a szczególnie niebezpieczne jest przenoszenie wirusa wywołującego raka (typy 16, 18).

Najczęściej połowa populacji cierpi na IDP, ponieważ wirus częściej atakuje szyjkę macicy kobiety, a zwłaszcza szyjkę macicy, gdzie różne typy wirusów powodują rozwój procesów dysplastycznych, a następnie raka szyjki macicy, ponieważ leczą dysplazję i dają dać upust wirusowi. Tak więc oś, reakcja polimerazy Lanzuga, ujawnia wirusowe DNA, a następnie „zły” lub „dobry” (onkogenny lub nieonkogenny) typ osadza się w ciele kobiety.

Inne infekcje IPSS i TORCH

Oczywiście reakcja polimerazy Lanczuga pozwala wykryć każdą obcą strukturę utworzoną z kwasów nukleinowych, dlatego test nadaje się do wykrywania wszystkich infekcji SPS i TORCH, które nie zawsze są wykrywane. Czy możliwe jest przeprowadzenie tak kosztownych badań w celu wykrycia gonokoków, które są dostępne i tańsze?

Infekcje TORCH i IPSS są ze sobą powiązane, dlatego istotne jest określenie, którą grupę należy do siebie przypisać. Dorastanie może być dla nich trudne, ponieważ mogą uzyskać różne grupy mikroorganizmów, które mogą być przenoszone metodami państwowymi zarówno dla młodych ludzi (niedobór odporności), jak i mogą stać się mniej interesującą zmiennością, powodując możliwy negatywny napływ podczas ciąży i ciąży.

PLR jest główną metodą wykrywania infekcji nabytych

Rozwój objawów klinicznych opiera się na różnych czynnikach, które determinuje moc samego PLR, które są głównymi zadaniami zarówno w teście ELISA, jak i jako pojedynczy test potwierdzający, zwłaszcza pod kątem objawów choroby. Przyczyną tak trudnej sytuacji może być infekcja wielobakteryjna, do której oprócz oczywistych chorób zaliczają się także patogeny psychiczne.

Ureaplazmę najczęściej obserwuje się u par chorych na mykoplazmę. To nie jest bez powodu. Gatunki te, podobnie jak chlamydia, nie są ani wirusami, ani bakteriami, żyją w środku komórek i można je wiązać z IPSS, chociaż ich obecność w zdrowym organizmie również nie jest rzadkością. Aby więc stworzyć zdrowy nos od chorego, potrzebne są specjalne metody, w których PLR jest uważany za najbardziej niezawodny, w zależności od specyficznego zachowania tych mikroorganizmów, badania okazują się nieskuteczne.

O co chodzi (typ 1, 2) i co dotyczy również wirusa opryszczki (typ 5), to sytuacja tutaj jest niejednoznaczna. Wskaźnik infekcji populacji Ziemi zbliża się do 100%, dlatego w tym okresie bardzo ważne jest zidentyfikowanie wirusa i jego dawki, która szczególnie odgrywa rolę w zjadliwości, nawet u osób dorosłych wirus przetrwał Jest w twoim organizmie , często nie powoduje pragnienia i nie daje oznak choroby.

Dlatego nie należy ignorować recepty lekarza na taki stan, a nawet w niektórych przypadkach reakcja polimerazy Lanzuga jest obowiązkową i niezbędną metodą diagnostyki laboratoryjnej, która może uchronić przed poważnymi powikłaniami nie tylko u kobiet ku, ach, mały człowiek istota, która jeszcze się nie narodziła.

Chcielibyśmy zrozumieć, że tak cudowna metoda jak PLR służy ludzkości już od ponad 30 lat. Wykonując to badanie, nie należy ograniczać się ryzykiem chorób zakaźnych. Spopularyzowana w biologii molekularnej reakcja polimerazy Lanzuga jest nierozerwalnie związana z genetyką. pomyślnie kontaktuje się z śledczym w celu zidentyfikowania konkretnej osoby, w medycynie okrętowej do założenia medycyny weterynaryjnej, w weterynarii jako klinika dla zwierząt istnieje możliwość zakupu nieruchomości przy drodze, a także w innych dziedzinach (przemysł, samorząd wiejski itp.).

Wideo: PLR - istota tej stagnacji

Genetyka bakterii Informacje do innej aktywności.

Reakcja polimerazy Lanzuga

Reakcja polimerazy Lanczuga jest metodą pozwalającą na duże zwiększenie (amplifikację) liczby cząsteczek DNA w analizowanej próbce (w tym w materiale biologicznym lub czystej hodowli).

Głównymi zaletami PLR jako metody diagnostycznej w mikrobiologii jest bardzo wysoka czułość, która pozwala na wykrycie wyjątkowo niskich stężeń patogenów w próbkach, a także regulowana specyficzność, która pozwala na wykrycie albo identyfikacji stworzeń na poziomie rodzajowym, gatunkowym lub podgatunkowym poziom. Główna część PLR wynika z jego wysokiej czułości - próbki mogą łatwo zanieczyścić DNA z kontroli pozytywnej lub produkt PLR, co doprowadzi do reakcji ujemnie-pozytywnej. Nakłada to surowe ograniczenia na umysły, w których odbywa się mieszanie PLR i praca z gotowymi produktami PLR.

Przeprowadzono PLR. Przygotowuje się mieszaninę reakcyjną łączącą następujące składniki:

Widziałem DNA ze śledzonej próbki,

Bufferny Rozchin

jony Mg2+ (niezbędne dla enzymu),

Dwa startery to jednoniciowe krótkie cząsteczki DNA (najczęściej o długości od 18 do 24 nukleotydów), komplementarne do końców różnych wykrywanych sekwencji DNA.

Trifosforany deoksynukleotydów Sumisha.

Żaroodporna polimeraza DNA (najczęściej wikoryzowana polimeraza Taq – polimeraza spotykana w Termus wodny).

Następnie tę reakcję można umieścić we wzmacniaczu, który jest faktycznie programowany przez termostat. We wzmacniaczu przeprowadza się 30-40 cykli zmian temperatury. Skóra z tych cykli składa się z trzech etapów (dz. ryc. 1):

Denaturacja (temperatura 94°C) – lance wodne pękają, a lance DNA rozchodzą się.

Startery opadły (temperatura ok. 50-60°C) – startery dodawane są na końcach sekwencji DNA. Ogólnie rzecz biorąc, w niższej temperaturze wzrost ilości DNA ze śledzonego fragmentu (renaturacja) jest bardziej efektywny energetycznie, ponieważ stężenie starterów w mieszaninie reakcyjnej jest o wiele rzędów wielkości większe od stężenia DNA w sekwencji (np. na przykład w cyklach kolby PLR), dlatego reakcja starterów przebiega przez DNA. Temperaturę topnienia dobiera się na podstawie temperatury topnienia (denaturacji) starterów.

Elongacja (temperatura 72°C) – polimeraza DNA wytwarza startery długiej macierzy DNA. Temperatura wskazuje optymalną temperaturę do wytwarzania wikkoryzowanej polimerazy DNA.

Wykrywanie wyników różni się w zależności od wersji PLR i jest opisane w sekcji „Typy PLR”.

Dynamika PLR

We wczesnych cyklach PLR pewna liczba podwójnych cząsteczek DNA, których wielkość zależy od położenia pomiędzy miejscami lądowania starterów, oddziałuje z cyklem skórnym. W ten sposób powstaje niewielka liczba istniejących cząsteczek DNA, które można wyekstrahować (ryc. 2).

Zatem we wczesnych cyklach siłę produktu PLR opisuje wzór m*2 n, gdzie m to wydajność próbki DNA, n to liczba cykli. Następnie reakcja osiąga plateau. Następuje to poprzez akumulację produktu reakcji, zmniejszenie stężenia starterów i trifosforanów deoksynukleotydów, a także wzrost stężenia pirofosforanu (ryc. 3).

Riznovidi PLR

Konwencja PLR

W tej wersji reakcji PLR następnie określa się liczbę cykli (30-40), po czym analizuje się, czy w mieszaninie reakcyjnej zgromadziła się akumulacja cząsteczek DNA wulkanicznego.

Ta opcja oceny stopnia zaawansowania PLR w przypadku żylaków jako metoda diagnostyczna jest metodą oczywistą. Pozytywna reakcja wskazuje na obecność śladów cząsteczek DNA, które znajdują się na obrazie. Negatywna reakcja na informację o jej istnieniu. Ilościowa ocena wyjściowych cząsteczek DNA jest niemożliwa poprzez reakcję na plateau.

Główną metodą identyfikacji produktu jest elektroforeza na żelach agarozowych lub poliakryloamidowych. Produkty PLR oddziela się w żelu pod polem elektrycznym w celu zmniejszenia ich masy cząsteczkowej. Żel zawiera berberys interkalujący (fluorescencyjny w stanie związanym z DNA - najczęściej etyd bromkowy). Zatem po wystawieniu na działanie światła ultrafioletowego możliwe będzie wykrycie obecności lub obecności znaku wskazującego DNA o wymaganej masie cząsteczkowej. W godzinie wykonywania PLR w celach diagnostycznych zawsze przeprowadza się kontrolę dodatnią i ujemną reakcji, co daje te same objawy (dz. ryc. 4).

PLR w czasie rzeczywistym

W tej wersji produkcji PLR zawartość produktu PLR w mieszaninie reakcyjnej jest rejestrowana w sposób ciągły podczas przebiegu reakcji. Umożliwia to wygenerowanie krzywej reakcji (ryc. 3) i na jej podstawie wyekstrahowanie z cząstek szeregu różnych cząsteczek DNA.

Jednym z rodzajów PLR prowadzonych w czasie rzeczywistym jest zastosowanie wikorystycznego środka interkalującego, który dodaje się bezpośrednio do mieszaniny reakcyjnej (najczęściej wikorystycznego SYBRGreen). Innym rodzajem jest zastosowanie jednego z typów sond fluorescencyjnych, które podłącza się do przestrzeni w środku produktu PLR, co pozwala na zwiększenie specyficzności detekcji (poz. rys. 5). Detekcja fluorescencji prowadzona jest w sposób ciągły podczas reakcji.

Oprócz możliwości szybkiej detekcji, zgodnie z konwencją, ujawnione zostały inne zalety PLR w czasie rzeczywistym. Ta wersja PLR jest prostsza, szybsza, a także nie wymaga otwierania probówek produktami PLR, co zmniejsza zanieczyszczenie innymi cząsteczkami. Główną wadą jest wyższa wydajność wzmacniacza ze względu na zwiększoną zdolność wykrywania fluorescencji w porównaniu do oryginału.

Cyfrowy Kilkisna PLR

Nowy, kosztowny i wciąż mało wszechstronny wariant PLR, który umożliwia dokładniejsze określenie siły DNA w próbce. W tej wersji reakcja mieszaniny zawierającej fluorescencyjny berberys jest podzielona na dużą liczbę mikroskopijnych objętości (na przykład kropelki w emulsji). Po przejściu PLR analizuje się, która część kropelek reaguje pozytywnie i najwyraźniej obserwuje się fluorescencję. Ta część będzie proporcjonalna do liczby cząsteczek DNA występujących u każdego osobnika.

PLR z odwróconej transkrypcji

Przed tą lub inną wersją PLR reakcja odwrotnej transkrypcji (RNA na DNA) za pomocą enzymu rewertazy jest hamowana. Metoda ta pozwala zatem na precyzyjną identyfikację cząsteczek RNA. Można to wykorzystać do wykrycia wirusów RNA lub określenia poziomu transkrypcji (mRNA) konkretnego genu.

Małyunok 1. Etapi PLR. Podkłady oznaczone są kolorem czerwonym.

Małyunok 2. Akumulacja podwójnych cząsteczek DNA otoczonych starterami podczas PLR.

Małyunok 3. Dynamika reakcji PLR przy różnych stężeniach cząsteczek DNA występujących w próbce. (a) – stężenie najwyższe (b) – stężenie pośrednie (c) – stężenie najniższe

Małyunok 4. Elektroforeza agarozowa produktów PLR. K+ - kontrola pozytywna (za obecność wykrywanego DNA). 1-7 - dodatkowe znaki (z czego 1-2 są pozytywne, 3-7 - negatywne). Kontrola ujemna K (video dna sukana DNA). W wielu przypadkach oprócz całego produktu widocznych jest więcej lekkich, nieswoistych produktów reakcji (dimerów starterów).

Małyunok 5. Metody wykrywania pod godziną vikoristannya PLR w ciągu godziny. (a) – berberys interkalowany – fluoryzuje po związaniu z dwuniciowym DNA (b) – Sonda Taqman – fluorescencja zachodzi, gdy sonda DNA jest rozszczepiana przez polimerazę DNA o aktywności endonukleazy 5'-3' w podsekcji fluoroforu tej gaśnicy. (c) – Sonda MolecularBeacon – fluorescencja pojawia się podczas hybrydyzacji sondy z całym fragmentem za przestrzenią odległego fluoroforu i gaśnicy (d) – Sondy LightCycler – fluorescencja akceptora pojawia się podczas hybrydyzacji przeniesionych sond (FRET).

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PLR, PCR) to metoda usuwania anonimowych kopii fragmentów DNA (genów) z wirusa biologicznego.

Istota PLR jako metody biologii molekularnej polega na wielkoskalowej próbnej kopii genu piosenki (rozszerzenie DNA) za pomocą specjalnych enzymów w mózgu in vitro. Ważną cechą PLR jest usunięcie kopii konkretnego fragmentu DNA (genu), który odpowiada danemu umysłowi. Synonimem procesu kopiowania DNA jest „amplifikacja”. replikacja DNA na żywo Możesz także użyć wzmocnienia. Jednakże w wyniku replikacji krótkie odcinki DNA (maksymalnie 40 000 par nukleotydów) ulegają amplifikacji podczas reakcji polimerazy Lancuga.

Podstawowe zasady

PLR to także kopiowanie fragmentów DNA za pomocą dwutlenku węgla in vitro podczas powtarzających się cykli temperaturowych. Jak przebiega proces reakcji w ciągu jednego cyklu temperaturowego?

Syntezę lancy nukleotydowej przeprowadza enzym polimeraza DNA. Aby jednak kolba zadziałała, enzym potrzebuje platformy startowej. Podobnie jak Majdan, „startery” (nasiona) działają jak syntetyczne oligonukleotydy posiadające w sumie 15-20 nukleotydów. Istnieją dwa startery (do przodu i do tyłu), są one komplementarne do odcinków matrycy DNA, a sam fragment DNA, otoczony starterami, jest kopiowany przez polimerazę DNA. Działanie polimerazy polega na sekwencyjnym dodawaniu nukleotydów komplementarnych do sekwencji matrycy DNA. Sam Tim w jednym cyklu temperaturowym ponownie syntetyzuje dwa nowe fragmenty DNA (ponieważ cząsteczka DNA to Dolantsyuzhkova, wówczas istnieją dwie matryce). Zatem w ciągu 25-35 cykli próbka gromadzi miliardy kopii wykresu DNA zidentyfikowanego przez startery. Strukturę zamkniętego cyklu można przedstawić w następujący sposób:

Denaturacja DNA (topienie, rozpad lanc DNA) – 95°C – 1 lub 2 hviliny;
upuszczone startery (startery wiążą się z matrycą DNA, temperatura tego etapu zależy od składu nukleotydów startera) - 60 ° C (na przykład) - 1 hvilina;
Elongacja DNA (polimeraza syntetyzuje DNA) - 72°C - 1 godzina (pozostawić na godzinę do momentu syntezy fragmentu).

Praktyczną podstawę do badania metody reakcji polimerazy Lanziuga w laboratorium muszą stanowić:

(lub co inaczej nazywa się termocyklerem);
systemy dla s (do wizualizacji wyników PLR);
systemy (do analizy wyników PLR);
(Do przygotowania próbki);
zestaw (mechaniczny i elektroniczny).

Oprócz wyposażenia głównego i pomocniczego do pełnego funkcjonowania laboratorium PLR, znajdują się w nim niezbędne materiały: sterylne końcówki, probówki, stojaki na probówki i dozowniki.

Baza odczynnikowa w podstawowym laboratorium PLR do przeprowadzenia pełnoprawnej reakcji polimerazy Lancuga obejmuje enzym polimerazę DNA wraz z buforem, startery (małe syntetyczne fragmenty DNA komplementarne do rdzenia i końca analizowanej matrycy DNA), sumę nukleotydów ( A, T, G, C). Oczyszczona woda jest również absolutnie niezbędna.

Zalety metody PLR

Wysoka czułość badania

Czułość metody jest taka, że amplifikację PLR i identyfikację sekwencji docelowej można osiągnąć w przypadku, gdy następuje to raz na 5 komórek.

Specyfika analizy

PLR umożliwia wykrycie DNA konkretnego czynnika zakaźnego w obecności DNA innych mikroorganizmów i DNA organizmu gospodarza, a także przeprowadzenie genotypowania. Dzięki specjalnemu doborowi składników reakcji (starterów) można natychmiast wykryć DNA powiązanych mikroorganizmów.

Wszechstronność metody PLR

Po prawej stronie, do diagnostyki PLR chorób zakaźnych i zastoinowych u ludzi, można wykorzystać tę samą wiedzę, stosować uniwersalne procedury przygotowania próbek (próbek) i wykonywania analiz, a także ten sam zestaw i odczynniki.

Oszczędzanie czasu

Ważną zaletą PLR jest liczba etapów pracy mikrobiologicznej kultury. Przygotowanie próbek, przeprowadzanie reakcji i analiza wyników maksymalnego odciążenia i dużej automatyzacji. W każdym razie wyniki mogą szybko spaść do 4-5 lat.

Skuteczność metody PLR

Zakres zbadanego materiału klinicznego

W wyniku reakcji polimerazy Lanczyga można zidentyfikować nie tylko materiał biologiczny choroby, ale także wiele innych substratów, w których można zidentyfikować cząsteczki DNA z liśćmi o dużej czułości, np. wodą, glebą, produktami spożywczymi, mikroorganizmami, i wiele więcej.

Wszystkie główne zalety tej unikalnej metody to wysoka czułość i swoistość, identyfikacja czynników zakaźnych i genotypowanie dowolnego ludzkiego genu, wysoka skuteczność i oszczędność czasu, uniwersalność. Istnieje podstawa praktyczna - obecna metoda PLR może być szeroko stosowana w diagnostyce klinicznej, praktyka lekarska oraz badania naukowe i bogactwo w innych dziedzinach.

Zastosuvannya PLR

Obszary stagnacji reakcji polimerazy Lancuga w wyniku współczesnej metody biologii molekularnej są zróżnicowane. Jest bogaty w szeroki zakres materiału, który można poddać analizie (podmiotem badań może być prawie wszystko, z czego można wyraźniej zobaczyć DNA), a także w wybrane startery. Główne obszary wdrożenia PLR:

Medycyna kliniczna

ekologia

monitorowanie rozwoju dovkilla
analiza produktów spożywczych
analiza organizmów genetycznie zmodyfikowanych (GMO)

medycyna okrętowa i kryminalistyka

Indywidualna identyfikacja
ustanowienie Ojczyzny

farmakologia

Medycyna weterynaryjna

badania naukowe (biologia molekularna, genetyka)

Organizacja laboratorium PLR

Informacje do kontraktowania

Nazwa	O nas	Wirobnitstwo	metoda	Nr kat.

PLR – diagnostyka infekcji, natychmiastowa i bardzo precyzyjna metoda wykrywania różnych chorób zakaźnych. Jaka jest różnica pomiędzy innymi analizami?

Skrót ten jest rozszyfrowany jako reakcja Lanzuga polimerazy. Według Wikipedii Keri Mullis urodziła się w 1983 roku, w historii Ameryki. Za swój wkład odmówiono mu Nagrody Nobla.

Po raz ostatni PLR zwyciężył wyłącznie metodą naukową, po czym z sukcesem został ustanowiony przez medycynę. Istota badania polega na rozpoznaniu czynnika zakaźnego na podstawie DNA i RNA. Choroba skóry wnikając w DNA, zmienia jego strukturę na inny typ. Już na sam widok zmienionego DNA laborant staje się świadomy tego, jak u człowieka przebiega choroba. Wśród innych zalet PLR:

Identyfikacja pierwotnej przyczyny infekcji, która utraciła „ślad” w DNA. W przypadku zidentyfikowania wielu chorób ważne jest zidentyfikowanie tych, od których wszystko się zaczęło. A dla prawidłowej diagnozy i wyboru skutecznego leczenia reakcja Lanzuga ma ogromne znaczenie;
Instaluje się go na PLR w miarę zmiany DNA i na określonym etapie transformacji. Jest to konieczne, aby wykluczyć wątpliwe infekcje;
Diagnostyka PLR jest czuła i wykrywa obecność pojedynczych bakterii i wirusów. Smród może zostać utracony we krwi po źle przepisanej kąpieli lub nieplanowanej przerwie w kąpieli. Minimalna ilość zdiagnozowana przy dekodowaniu PLR to 10 dni klienckich. Inne metody testowania są mniejsze;
Mikroorganizmy chorobotwórcze wykrywa się w zależności od objawów PPSS. Choroba wykryta we wczesnym stadium nie trwa tak długo jak postać zaawansowana;
Wyniki PLR chorób zostaną wzięte pod uwagę, aby szybko je zakończyć. Zdiagnozowanie infekcji zajmuje nieco ponad 4-6 lat. Razem z odszyfrowaniem cały proces trwa nieco dłużej niż 1-2 dni;
Jednorazowo pobiera się materiał DNA w celu przeprowadzenia 5-6 testów. Chory nie będzie miał możliwości wielokrotnego wykonywania rozmazów;
PLR i śledzenie infekcji nie stoją w miejscu, obszar ten stale się rozwija. Wraz z odkryciem nowych systemów testowych o zwiększonej czułości zmniejsza się prawdopodobieństwo przeprowadzenia dalszych badań. Ponieważ wcześniej była dostępna tylko dla mieszkańców megamiast, obecnie lekarze w przychodniach szpitalnych w regionach nie wyobrażają sobie leczenia bez niej chorób.

Cechy metody PLR:

Dokładność (korekty są minimalne, a ich częstotliwość nie przekracza 0,01%);
Czułość (test „zlicza” pojedyncze bakterie we krwi i rozmazach);
Specyficzność (PLR wykrywa infekcje, które często ujawniają się dopiero na ważnym etapie);
Unikalność (analiza wyników w sytuacjach, gdy inne badania niczego nie ujawniają).

Wyniki analizy PLR

Jak działa metoda reakcji Lanzuga i jak przygotować się przed analizą?

Reakcja Lanzuga w mózgach laboratoryjnych przekazuje namnażanie bogatych próbek DNA i RNA poprzez identyfikację tej samej uszkodzonej części. Kwasy amplifikuje się (sprzęga) za pomocą preparatów enzymatycznych. Za pomocą enzymów wikorystycznych asystent laboratoryjny usuwa wystarczającą liczbę kopii patogennego fragmentu DNA, aby dopasować PLR do objawów tych i innych chorób wywołanych infekcją.

Z reguły analizie poddaje się materiał biologiczny pobrany poprzez pobranie próbki lub rozmaz. W celu identyfikacji (rozszyfrowania infekcji przenoszonych drogą płciową) pobiera się wymaz z naskórka, szyjki macicy lub macicy w celu wykonania PLR. Czasami wikoryści też walczą.

Aby potwierdzić lub wykryć obecność zapalenia wątroby, toksoplazmozy lub wirusa HIV, należy pobrać krew z żyły. Krew pobrana z palca często daje wynik negatywny na mleko. Mononukleozę rozpoznaje się po pobraniu materiału z gardła muła. Gruźlicę można wykryć po pobraniu plwociny, co wyraźnie widać u pacjentów z ranami.

Wymaz z macicy i szyjki macicy w kierunku PLR to prosta analiza, nie ma sensu próbować. Na 2-3 dni przed wydarzeniem będziesz zachęcany do prowadzenia formalnego życia. Obecnie żele i mleko na bazie naturalnej stosowane są do higieny szczególnej. Można pić ciepłą wodę z kranu. Przestań się myć - wieczorem przed raną do laboratorium lub gabinetu lekarskiego.

Ważne jest również leczenie pleśniawki za pomocą kremów, maści, czopków i sprayów, które przeprowadza się. Wymaz z pierwszej miednicy pobiera się po lub bezpośrednio po menstruacji. Aby uzyskać dokładne wyniki, zaleca się nie korzystać z toalety przez 2-3 lata przed pobraniem wymazu PLR.

U osób z reakcją Lanzuga pobiera się wymaz z cewki moczowej. Materiał biologiczny pobiera się za pomocą sterylnej sondy lub wacika, który wprowadza się do nasion. W ciągu godziny zabiegu może wystąpić lekki dyskomfort lub obrzęk wątroby. Ludzie muszą także spędzać dużo czasu na nauce seksu i higieny. Okres przed analizą jest przepisywany, leczenie antybiotykami i innymi lekami. Jeśli po pobraniu dyskomfort nie ustępuje, zaleca się jak najszybsze udanie się do kliniki.

Dopuszczalne jest wykonanie u pacjenta badań krwi lub wymazu z narządów pacjenta. Materiał genetyczny umieszcza się w urządzeniu do amplifikacji PLR i tam dodaje się enzymy. DNA podgrzewa się do temperatury 90-95°C, aż smycz uformuje się w szpikulec. Proces ten nazywa się denaturacją. W ciągu godziny pracy reaktora z jednej próbki DNA i RNA powstają tysiące kopii do analizy (rozszyfrowania reakcji).

Wyniki diagnostyki PLR

Reakcja Lanzuga pokazuje ciężkość infekcji, a dokładnie liczbę oczywistych powikłań. Odkopywanie pozostałych skał polega na indywidualnym wprowadzeniu genów mutacyjnych do ludzkiego DNA w celu ujawnienia możliwości zmiany genotypu.

Co ujawnia diagnoza zakażenia PPR?

Dekodowanie wyników analizy jest wyraźnie widoczne dla wykwalifikowanego lekarza. Siła reakcji Lanczyga pozwala nam potwierdzić lub wykryć obecność takich chorób:

Jak wynika z tej listy, diagnostyka PLR zapewnia lekarzom szeroką gamę wysoce specjalistycznych specjalizacji bez ograniczonych możliwości. Metodę można zastosować w pulmonologii, wirusologii, chorobach zakaźnych, onkologii, gastroenterologii, hematologii, ginekologii i urologii.

Deszyfrowanie PLR: wyniki

Analizy reakcji Lancuga lekarze oceniają indywidualnie dla pacjenta skórnego z oczywistymi patologiami i chorobami przewlekłymi. Wyniki analiz PLR wskazują, jak wspomniano powyżej, na specyficzną charakterystykę bakterii chorobotwórczych. Zajmując się nimi, lekarz ustala stopień ciężkości i stadium choroby. Na podstawie tych wskaźników wskazano dalej dawkowanie leków i czas trwania leczenia.

Ujemny wynik PLR oznacza, że pobrany materiał biologiczny na co dzień wykazuje obecność jakichkolwiek wirusów lub infekcji. Dodatni PLR jest sygnałem przed alarmem. Wykryto także infekcję we krwi i innych obszarach biologicznych pacjenta.

Ponieważ wartości są minimalne, można mówić o prostej obecności choroby, a nie tylko o aktywnym rozwoju choroby. Prosty nosiciel infekcji, który objawia się jedynie PPR, ale nie wykazuje innych typowych objawów, musi być stale konsultowany przez lekarza.

Ważne jest, aby nie panikować i pamiętać, że większość znanych nauce wirusów można leczyć lekami przeciwbakteryjnymi. Ich selekcja i zastępowanie jednym w przypadku nieskuteczności może pozbawić lekarza kwalifikacji, czego dowodem jest leczenie tej i innych chorób.

Odszyfrowanie PLR można przeprowadzić nie tylko według uznania lekarza, ale według uznania władz. Często boimy się kobiet, które w najbliższej przyszłości planują zajść w ciążę, aby uniknąć możliwości zarażenia chorobami przenoszonymi drogą płciową. W przypadku skierowania na konsultację regionalną z pacjentem, nie ma potrzeby przeprowadzania dokładnej diagnozy.

PLR jest przepisywany kobietom obowiązującym, które dokonały niewielkiej liczby aborcji lub aborcji z różnych powodów. Przed EBC przeprowadzana jest analiza w celu zidentyfikowania wszystkich przyczyn możliwego wydalenia zapłodnionego jaja.

Ludzie często przeprowadzają PLR po zwolnieniu, w porze jakiegoś wakacyjnego romansu lub ślubu. Diagnostyka pomaga im nie narażać życia i zdrowia potencjalnych partnerów seksualnych.

Często PLR jest dla pacjenta jedyną szansą na powrót do zdrowia po chorobie w fazie embrionalnej, jeśli niepotrzebne ryzyko komplikuje trudna podróż.

Ważniejsze może okazać się wykonanie rozmazu metodą PLR w diagnostyce chorób zakaźnych:

Bezpośrednia diagnostyka chorób zakaźnych i schorzeń.

Wiele tradycyjnych metod diagnostyki laboratoryjnej opiera się na wykrywaniu codziennych chorób pod kątem różnych objawów pośrednich. Przykładowo diagnostyka metodą ELISA opiera się na wykrywanych we krwi pacjenta białkach, będących produktami rozkładu czynników zakaźnych, na podstawie których lekarz może postawić kolejną diagnozę. Metoda analizy PLR pozwala na bezpośrednie wskazanie obecności określonej próbki DNA choroby w materiale pobranym od pacjenta.

Wysoka swoistość diagnostyki PLR.

W trakcie analizy badany materiał ujawnia fragment DNA, który jest specyficzny i ma moc dla konkretnego organizmu – bakterii lub wirusa. Ten fragment DNA jest unikalny i nietypowy dla infekcji zwierzęcej na Ziemi.

Wysoka czułość PLR.

Zakażenie może wystąpić, jeśli materiał pobrany od pacjenta zawiera mniej niż jedną komórkę bakterii lub wirusa. Porównywalne z innymi metodami diagnostyki immunologicznej i mikrobiologicznej: czułość analizy PLR – 10-100 komórek na próbkę, pozostałe metody – 103-105 komórek.

0Array (=> Analizy) Tablica (=> 2) Tablica (=>.html) 2

Wszechstronność analizy PLR.

Do badań PLR można wykorzystać praktycznie każdy materiał, którego nie można zbadać innymi metodami: śluz, wycinki, krew, surowicę, plwocinę, ejakulat, zeskrobiny komórek nabłonkowych – fragmenty itp. Zakażenie może nastąpić w dowolnej postaci biologicznej. materiałów i tkanek.

Wyniki analizy PLR cieszą się dużym poparciem.

Jednolita metoda całej obróbki materiału pobranego od pacjenta do analizy, detekcja produktów reakcji, automatyczna amplifikacja PLR pozwala na postawienie nowej diagnozy PLR w ciągu 4-5 lat. Jednocześnie na kulturowe metody obserwacji poświęca się znacznie więcej niż godzinę - od wielu dni do wielu dni, ponieważ konieczne jest zobaczenie, a następnie rozwinięcie patogenu na hodowli komórkowej.

Możliwość zdiagnozowania każdego rodzaju infekcji.

Wysoka czułość metody PLR pozwala na rozpoznanie infekcji nie tylko w ostrej fazie choroby, ale także na wykrycie infekcji przewlekłych oraz identyfikację pojedynczych bakterii i wirusów.

Rozmaz metodą PLR umożliwia wykrycie infekcji, których nie można wykryć rozmazem flory: chlamydii, ureaplazmozy, mykoplazmozy, opryszczki narządów płciowych.

Jakie są istotne zalety metody badawczej i diagnostyki PLR? Do wad diagnostyki PLR zalicza się:

Możliwość uzyskania wyniku pozytywnego

Analiza PLR może wykazać wynik pozytywny, jeśli infekcja jest już martwa, „zabita” przez antybiotyki, a martwe komórki nadal znajdują się w tkankach pacjenta. Jak to możliwe? Całkiem proste. Na przykład infekcja żyje w tkankach nabłonka (na błonie śluzowej narządów lub oczu). Oboje byli zadowoleni. „Odnowienie” nabłonka komórek zajmuje godzinę. Jeżeli lekarz zabierze materiał przed całkowitą odnową komórek, może on zawierać martwe komórki zakażone. Klitini oczywiście usuwa materiał genetyczny - DNA lub RNA organizmu, jak myśli PLR. PLR nie oddziela martwych komórek od żywych: szuka DNA i „klonuje” je w dużych ilościach. Wynik takiej analizy jest pozytywny. Prawdą jest, że jesteśmy hipnopozytywni.

Niemożność PLR „odzyskania” martwej infekcji od żywej utrudnia wykrycie PLR i kontrolę skuteczności leczenia. Główną zasadą jest oczywiście całkowite wyeliminowanie martwych nadmiarów infekcji z organizmu, co przeciętny człowiek przeżywa 4-8 lat. Dlatego po przyjęciu pozostałych tabletek antybiotyku można i należy zastosować metodę PLR w celu monitorowania skuteczności leczenia.

gastroenterologia kompleks diagnostyczny - 5360 rubli

TILKI W BEREZNYM oszczędności - 15%

1000 rubli Pobieranie EKG z deszyfrowania

- 25%podstawowy
pójść do doktora
terapeuta w weekendy

980 rubli. pierwsza wizyta u hiruterapeuty

wizyta u terapeuty - 1130 rubli (alternatywnie 1500 rubli) „Tylko w tygodniu, w soboty i tygodnie wizyta u terapeuty z 25% rabatem – 1130 rubli zamiast 1500 rubli (zabiegi diagnostyczne płatne zgodnie z cennikiem)

Na późniejszym etapie kontrolę zakazów można przeprowadzić inną metodą kulturową lub poprzez zasiew: jedynie żywe mikroorganizmy, które się rozmnażają, mogą służyć jako przejaw niestosowania przemocy.

Nie zaleca się stosowania analizy PLR do diagnozowania gardnerelozy, ponieważ gardnerelli – osoby cierpiące na tę chorobę, w niewielkiej liczbie przypadków, zwykle żyją w glebie. DNA tych bakterii z wikorystycznym PLR wkrótce zostanie utracone. Gardnerella nie jest widoczna w rozmazie, a bakterioskopia w tym przypadku jest wystarczającą metodą rozpoznania gardnerellozy i monitorowania leczenia.
Różnorodność mikroorganizmów

Każdy mikrob może się zmienić, a jednocześnie DNA. Najpiękniejszym tyłkiem tego galusa jest wirus grypy. Po jednorazowym przebyciu choroby u człowieka powstają przeciwciała przeciwko wirusowi. Czysto teoretycznie, jeśli chociaż raz zachorowaliśmy na grypę, to tak jak w przypadku grypy, nie jest naszą winą, że zachorujemy ponownie. Prawie boli nas gardło. Jaki jest powód? Wirus „mutuje”, nieznacznie „zmieniając” swój genom, a także nasz układ odpornościowy, nasze przeciwciała nie „rozpoznają” już starego gościa w nowym wyglądzie. To nie szaleństwo, że znowu choruję na grypę...

Projektując wzmacniacz (system testowy PLR) wybiera się fragment DNA specyficzny dla danego mikroorganizmu, który jest najmniej podatny na zmiany. Jest „wybrany” z tzw. wysoce konserwatywnej części DNA. Alternatywnie obfitość mikroorganizmów może prowadzić do tego, że określone genotypy lub szczepy badanego organizmu mogą powodować mutacje w genomie, które ulegają amplifikacji (klony), a tym samym nie zostają wyłapane przez system testowy.

Tym samym różne systemy badawcze są jednym z powodów, dla których analizy wykonywane w różnych laboratoriach i różnych klinikach przy użyciu tej samej metody PLR mogą dawać diametralnie różne wyniki. Aby w jak największym stopniu uniknąć mutacji, opracowano obecnie standardy regulujące badania (w tym weryfikację pod kątem reakcji krzyżowych, a także badanie wskazanych izolowanych szczepów choroby), które wymagają, aby system testowy najpierw udał się do rynku i Czy Vicoristan będzie używany do diagnozowania Twojego zdrowia. Dlaczego dobre kliniki i laboratoria używają Vicoristanu w pozostałych generacjach systemów testowych? A nasze centrum medyczne „Euromedprestige” jako jedno z nielicznych może zapewnić swoim klientom jasną diagnostykę.