PCR usuli yordamida PCR diagnostikasi tahlilini qanday o'tkazish kerak. Tekshiruvning yuqori sezuvchanligi

PLR (polimeraza Lanzug reaktsiyasi) molekulyar biologiyaning yutug'i bo'lib, 20-asr oxiri va 21-asr boshlarida klinik laboratoriya diagnostikasining asosiy usullaridan biri bo'lib, tibbiyot fanining turli bemorlariga katta zarar keltiradi.

Shu tarzda, inson tanasining millionlab hujayralarining o'rtasida bo'lgani kabi, tirik virusning o'zi emas, balki uning DNKsining faqat bir qismi vayron bo'ladi, keyin PLR, uni bezovta qila olmagani uchun, harakat qilishi mumkin. ijobiy natija "begona" mavjudligi haqida xabar bering. PLR ning mohiyati uning asosiy afzalligidir.

Gidnosti va kamchiliklari

PLR diagnostikasini amalga oshiradigan laboratoriya test tizimlarining mavjudligi va tibbiyot xodimlarining malakasiga katta ehtiyoj sezadi. Bu yuqori texnologiyali laboratoriya bo'lib, u juda sezgir va yuqori o'ziga xos reagentlarning yaxshi tartiblangan arsenaliga ega, shuning uchun maxsus tanqislik yo'q. Klinik ko'rinishlar yo'qligida ijobiy natija ko'rsatadigan va shu bilan shifokorni ikkilanish oldiga qo'yadigan har qanday narsa: davolanishni boshlash kerakmi yoki yo'qmi?

Bemorga g'amxo'rlik qiladigan shifokor, kasallik belgilari bo'lmasa, test natijalarining ishonchliligiga shubha qila boshlaydi. Biroq, PLR tizimining yuqori sezuvchanligi klinikadan oldingi bosqichda uyg'onish qo'ng'irog'ini ko'rsatadigan xotiraga asoslanadi va bu holatda ijobiy natija uzoq zarba bilan emas, balki bir yildan tezroq bo'ladi. Shunga asoslanib, shifokor boshqa "ma'qul" va "qarshi" dalillarni hisobga olgan holda terapiyaning foydaliligi to'g'risida o'z qarorlarini qabul qilish uchun javobgardir.

Polimeraza Lanziug reaktsiyasidan foydalangan holda diagnostikaning afzalliklari aniq:

• Yuqori o'ziga xoslik, 100% ga etadi, bu nuklein kislotalarning ma'lum bir organizmda kuchli yoki odamlar uchun begona zarrachalarining namunalarida mavjudligi bilan bog'liq;
• Yuqori mahsuldorlik, va hatto PLR yuqori texnologiyali avtomatlashtirilgan texnika bo'lib, material yig'ish kunida test o'tkazish va bemorni har qanday tashvish holatida muntazam ravishda davolash imkonini beradi;
• PLR, bir parchalanish ustida ish, haqida tergov bir qator amalga oshirish mumkin bir qator bayramlarni ochib beradi go'yo u shunday xazina bo'lardi. Masalan, xlamidiya infektsiyasini tashxislashda, PLR asosiy usullarga qo'llanilganda, xlamidiya uchun Neisser (gonokokk) - signalistni aniqlash mumkin. Bundan tashqari, natijalarning ishonchliligiga salbiy ta'sir ko'rsatmaydi;
• PLR usuli yordamida sinov inkubatsiya davrida xavfli mikroorganizmlarni ochib beradi Agar kasallik hali tananing oxiriga etib bormagan bo'lsa, unda erta tashxis patologik jarayonning kelajakdagi rivojlanishini taxmin qiladi, bu esa yangi narsaga tayyorgarlik ko'rish va uni butunlay qabul qilish imkonini beradi.

Bundan tashqari, diagnostika paytida ba'zida paydo bo'ladigan chalkashliklarni bartaraf etish uchun PLR, shuningdek, zarur bo'lishi mumkin bo'lgan maqsadlarda ekspert tomonidan tuzatish usulidan foydalangan holda uning natijalarini yozib olish (fotosurat, kompyuter) bilan o'zini himoya qiladi.

PLR turlarida norma salbiy natijalarni baholashdir, bu begona nuklein kislotalarning bo'laklari mavjudligini ko'rsatadi, ijobiy dalil tanada infektsiya mavjudligini ko'rsatadi, raqamli qiymatlar virusning kuchini va sinov vaqtida uning kontsentratsiyasini ko'rsatadi. Proteo "PLR" mavzusida maxsus tadqiqot o'tkazgan ushbu shifokorning tahlilini tashqaridan shifrladi. Natijalarni o'zingiz talqin qilishga urinishning ma'nosi yo'q, chunki siz hamma narsa sodir bo'lishi bilanoq, noto'g'ri tushunishingiz va maqtanishni boshlashingiz mumkin.

PLR nimadan qo'rqadi, u nima qila oladi va biz bunga qanday tayyorgarlik ko'rishimiz mumkin?

Boshqa har qanday tergov kabi, Ba'zida test natijalari ijobiy yoki salbiy bo'ladi, de PLR ​​aybdor emas. Bunday vaziyatlarda quyidagilar yuzaga kelishi mumkin:

1. Reaksiya bosqichlaridan biriga texnologik jarayonni buzish;
2. Materialni yig'ish, uni saqlash va tashish uchun Nedotrimannya qoidalari;
3. Materialda uchinchi tomon elementlarining mavjudligi.

Ya'ni, PLR - infektsiyalarni tashxislashdan oldin, unga hurmat bilan, ehtiyotkorlik bilan va aniq yondashish kerak, aks holda material tuzilishini o'zgartirishi yoki butunlay qulashi mumkin.

PLR diagnostikasi bosqichlari. Milkovning natijalari tergovning har qanday bosqichida buzilishi mumkin.

Infektsiyalarning PLR diagnostikasi boshqa laboratoriya usullari qatorida "oltin standartlar" toifasiga kiradi, shuning uchun ular kundalik kasalliklarni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin, bu birinchi qarashda jiddiy narsani ko'rsatmaydi:

• Turli xil lokalizatsiya sil kasalligi, pnevmoniya (shu jumladan xlamidiya tufayli kelib chiqqan atipik pnevmoniya);
• Bolalik infektsiyalari (sigir qizilcha, parotit, chirp);
• difteriya;
• Salmonellalar;
• Zoonoz yuqumli kasallik - listerioz (kasallik limfa tugunlari, markaziy asab tizimi, ichki organlarning shikastlanishi tufayli turli xil belgilar bilan tavsiflanadi);
• Epstein-Barr virusi keltirib chiqaradigan kasallik (yuqumli mononuklyoz va boshqalar);
• Papilomavirus infektsiyasi bilan qo'zg'atilgan onkologik patologiya (ushbu turdagi IDP);
• Borelioz (Lyme kasalligi, Shomil bilan yuqadigan ensefalit);
• Helicobacter pylori infektsiyasi, odamning vulvasida yashovchi Helicobacter pylori mikrobidan kelib chiqadi. Helicobacter pylori skutum yoki 12-raqamli yo'g'on ichak saratoni rivojlanishiga sabab bo'lishi isbotlangan;
• va deyarli hamma narsa.

Kasallik orqali yuqadigan infektsiyalarning PLR diagnostikasi, ayniqsa, bunday shaklda yuzaga keladigan kasalliklar uzoq vaqt davomida hech qanday klinik ko'rinishsiz o'tib ketganda, lekin keyinchalik kasal bo'lganda faollasha boshlaganda juda muhimdir. sog'lig'ini xavf ostiga qo'yish va bolaning hayotiga zarar etkazish. Xuddi shu tarzda i dan foydalaning. Ularning harakatlari ("mash'al") darhol va IPSShgacha o'rnatiladi, qolganlari hisobotni ko'rib chiqishni talab qiladi. Maqolaning keyingi bo'limlarida eng mashhur usullar haqida ko'proq bilib olishingiz mumkin.

Ishonchli natijaga erishish uchun qanday qilib to'g'ri tayyorgarlik ko'rish kerak?

Shuni ta'kidlash kerakki, PLRga tayyorgarlik oddiy va bemor tomonidan hech qanday maxsus harakat talab etilmaydi. Uchta noqulay vazifani imzolash kerak:

1. Tahlil sanasidan 24 yil oldin maqola bilan bog'lanmang;
2. Tomirdan qon to'plash va tahlil qilish uchun siz ro'za tutadigan qayiqqa kelishingiz kerak, lekin siz gapirmaguningizcha icholmaysiz;
3. Menga imkon qadar tezroq bering (steril bankada, dorixona oldiga qo'ying).

PLR har qanday biologik muhitda ishlatilishi mumkin

PLR usuli "qonga chanqoqlik" ga to'sqinlik qilmaydi, u yuqumli agentlarning tarqalishini oldini olish uchun biologik vositadan foydalanadi. tanlang - qo'shimcha tekshirish uchun olinishi kerak bo'lgan narsa shifokorga yuboriladi.

Shu tarzda, signalni qidirishda, qon tahlilidan tashqari (garchi biz boshqa materiallarga yaqinlashishimiz va ko'p hollarda parallel ravishda davom etishimiz mumkin bo'lsa-da), siz vikorizatsiya qilishingiz mumkin:

• (Siydik-jinsiy yo'lning ko'rinishi);
• Og'iz bo'shlig'i, kon'yunktiva, nazofarenks va arteriyalarning shilliq pardalari parchalari (ayollar uchun - bachadon bo'yni va mushak tizimidan, erkaklar uchun - siydik yo'llaridan oling);
• Slinu;
• Sperma;
• oldingi tokdan;
• Plasenta to'qimasi va amniotik suyuqlik (amniotik suyuqlik);
• Sedimentatsiya (tsentrifugalashdan keyin), masalan, IPSS va mikobakteriya tuberkulyozining turlarini aniqlash;
• Xuddi shu modda bilan balg'am va plevra suyuqligi;
• ekssudat;
• Agar markaziy asab tizimining yuqumli lezyoniga shubha bo'lsa, orqa miya;
• Jigardan olingan biopsiya materiali (bioptat), 12 tirnoqli ichak, skuta va boshqalar.

Yuqorida aytib o'tilganlardan oldin, shuni qo'shimcha qilmoqchimanki, barcha holatlarda, qirqish va kuzatishlarda sinov uchun material etarli bo'ladi, PLR usuli bo'yicha ba'zi sinovlar ko'p kuch talab etmaydi, tahlil bilan cheklangan. ko'p mikrolitrlarni ependorf tipidagi mikrotubadan olib, Vivchenniyaga yuborish kerak.

Kasallik va turg'unlik PLR

VIL va polimeraza Lanzug reaktsiyasi

Agar siz anonim testdan o'tsangiz va ijobiy natijalarga erishsangiz, immunoblotting diagnostikasi yana takrorlanishi kerak. Tashxis tasdiqlangach, bemorga qo'shimcha tekshiruvlar buyuriladi:

1. Qo'shimcha immunologik reaktsiyalarga asoslanib, limfotsitlar sonining mutlaq qiymatlari CD 4 (immunokompetent hujayralar - T-yordamchilar yoki buyrak hujayralari), infektsiya bizga birinchi bo'lib hujum qiladi, shundan so'ng ular o'zlarini sarflaydi va asosiy organlar yo'q qila olmaydi. o'zlarining" va boshqa birovning". Qon plazmasida aylanib yuruvchi RNK virusi organizmdagi oddiy hujayralar bilan yanglishtirib, ularga reaksiyaga kirishmaydi;
2. PLR usuli bilan RNK virusini aniqlash va virus zarralari kontsentratsiyasini bosqichga, patologik jarayonning og'irligiga va ushbu ma'lumotlarning muvozanatiga asoslangan prognozga qarab taqsimlash.. Shubhasiz, rejada "norma" so'zi yo'q, shuning uchun reaktsiya har doim ijobiy bo'ladi va raqamli qiymatlarni dekodlash shifokorning vakolatiga kiradi.

PLR va gepatit

PLR usuli gepatitni aniqlay oladi, ko'pincha test boshqa usullar bilan yomon tashxis qo'yilgan gepatitni tashxislash uchun ishlatiladi.

Gepatit C virusi (RNK) inson tanasidagi xatti-harakatlari uchun javobgardir. Jigar hujayralari (gepatotsitlar) genomiga o'ralgan holda, u 2 yil yoki 20 yil ichida paydo bo'lishi mumkin bo'lgan kerakli vaqtda u erda qoladi, shuning uchun shifokorlar unga "o'lik qotil" laqabini berishdi. Gepatit C jigar parenximasida malign jarayonning rivojlanishiga olib keladi, bu keyingi bosqichlarda o'zini namoyon qiladi. Immun tizimi bularning barchasini belgilamaydi, virusni gepatotsit deb hisoblaydi. Biroq, virusga qarshi antikorlar ko'p hollarda ishlab chiqariladi va ular sog'lom immunitet tizimini himoya qilmaydi. Gepatit C uchun Elishay diagnostikasi uchun bu juda ma'lumotli emas, chunki bu virus izlarini yo'qotganligini ko'rsatadi va uning o'zi yuqtirganligi noma'lum. HCV infektsiyasi holatlarida o'z-o'zini yo'q qilish sodir bo'ladi, chunki virusga qarshi antikorlar yo'qoladi va abadiy aylanishda davom etadi (immunologik xotira). PLR antikorlarning yaratilishidan sezilarli darajada oldinroq bo'lib, virusli zarrachani 1-1,5 kun ichida aniqlay oladi, AT esa tug'ilishdan oldin 2 oylik oraliqda paydo bo'lishi mumkin.

Gepatit C virusining inson tanasida tarqalishiga shubha qilingan hollarda PLR diagnostikasi tadqiqotning eng maqbul usuli hisoblanadi, chunki bemorning qonida yoki jigar biopsiyasida "qonuniy dushman" mavjudligini aniqlash mumkin. .

Biroq, ba'zida AT ijobiy bo'lsa va PLR natijasi salbiy bo'lsa, tutilish bo'lishi mumkin. Bu usul virusning intensivligi juda past bo'lganida yoki qon oqimiga kirmasdan "harakatsiz" jigarga kirganda qo'llaniladi. Haqiqatni bilish uchun bemordan takroriy tahlil yoki hatto bir nechtasi olinadi.

Papilomavirus infektsiyasi

O'z-o'zidan infektsiyaning paydo bo'lishi mumkin emasligi sababli, hech narsani oshkor qilmasdan, hukmdorning tanasida uzoq vaqt davomida saqlanib qolishi mumkin, men uning narxiga shubha qilmayman, chunki PLR parchalari bo'lmagan. rivojlangan va kasallik belgilari kundalik edi. Biroq, papillomavirus infektsiyasining mavjudligi, latent yoki yashirin bo'lishidan qat'i nazar, inson salomatligi uchun yaxshi emas va saraton kasalligini keltirib chiqaradigan virus turini (16, 18 turdagi) olib yurish ayniqsa xavflidir.

Ko'pincha, aholining yarmi IDPdan aziyat chekadi, chunki virus ayollarning bachadon bo'yni va ayniqsa bachadon bo'yni ta'sir qilish ehtimoli ko'proq bo'ladi, bu erda turli xil viruslar displastik jarayonlarning rivojlanishiga olib keladi, keyin esa bachadon bo'yni saratoni displaziyani davolaydi va beradi. virusga qarshi erkinlik. Shunday qilib, eksa, polimeraza Lanzug reaktsiyasi virusli DNKni aniqlaydi, so'ngra ayolning tanasida "yomon" yoki "yaxshi" (onkogen yoki onkogen bo'lmagan) turi joylashadi.

Boshqa IPSS va TORCH infektsiyalari

Shubhasiz, polimeraza Lanczug reaktsiyasi nuklein kislotalardan hosil bo'lgan har qanday begona tuzilmani aniqlay oladi, shuning uchun test har doim ham aniqlanmaydigan barcha SPS va TORCH infektsiyalarini aniqlash uchun javob beradi. Mavjud va arzonroq bo'lgan gonokokklarni aniqlash uchun bunday qimmat tekshiruvlarni o'tkazish mumkinmi?

TORCH infektsiyalari va IPSS bir-biriga bog'langan, shuning uchun qaysi guruh bir-biriga tayinlanishi kerakligini aniqlash muhimdir. Ularning o'sishi qiyin bo'lishi mumkin, chunki ular davlat usullari bilan ham yoshlar uchun (immunitet tanqisligi) yuqishi mumkin bo'lgan mikroorganizmlarning turli guruhlarini olishlari mumkin va kamroq qiziqarli volatillik bo'lib, homiladorlik va homiladorlik davrida mumkin bo'lgan salbiy oqimni keltirib chiqarishi mumkin.

PLR orttirilgan infektsiyalarni aniqlashning asosiy usuli hisoblanadi

Klinik ko'rinishlarning rivojlanishi turli omillarga asoslanadi, ular faqat PLR kuchi bilan belgilanadi, bu Elishay bilan ham, Elishay bilan ham asosiy vazifalardir. yagona tasdiqlovchi test sifatida, ayniqsa kasallik belgilari uchun. Bunday qiyin vaziyatga polimikrobiyal infektsiya sabab bo'lishi mumkin, bu aniq kasalliklardan tashqari, ruhiy patogenlarni ham o'z ichiga oladi.

Ureaplasma ko'pincha mikoplazmasi bo'lgan juftliklarda uchraydi. Bu bejiz emas. Bu turlar, xlamidiya kabi, viruslar ham, bakteriyalar ham emas, ular hujayralar o'rtasida yashaydilar va IPSS bilan bog'lanishi mumkin, garchi ularning sog'lom tanada mavjudligi ham kamdan-kam uchraydi. Shunday qilib, kasal odamdan sog'lom burunni yaratish uchun maxsus usullar talab qilinadi, bu erda PLR eng ishonchli deb hisoblanadi, bu mikroorganizmlarning o'ziga xos xatti-harakatlariga qarab, tekshiruvlar samarasiz deb topiladi.

Gap nimada (1, 2-toifa) va qaysi biri herpesvirusga (5-toifa) tegishli bo'lsa, bu erda vaziyat noaniq. Yer aholisining infektsiya darajasi 100% ga yaqinlashmoqda, shuning uchun bu davrda virusni va uning dozasini aniqlash juda muhim, bu ayniqsa virulentlikda rol o'ynaydi, hatto kattalar odamlarda ham virus omon qolgan. tashnalikni keltirib chiqarmaydi va kasallik belgisini bermaydi.

Shuning uchun, bunday holat uchun shifokorning retseptini e'tiborsiz qoldirmaslik kerak va hatto ba'zi hollarda, polimeraza Lanzug reaktsiyasi laboratoriya diagnostikasining majburiy va zarur usuli bo'lib, u nafaqat ayollarda ku, oh, kichkina odamni jiddiy asoratlardan himoya qilishi mumkin. hali tug'ilmagan bo'lish.

PLR kabi mo''jizaviy usul insoniyatga 30 yildan ortiq vaqt davomida xizmat qilayotganini tushunmoqchimiz. Ushbu testni o'tkazishda yuqumli kasalliklar xavfi bilan cheklanmaslik kerak. Molekulyar biologiya sohasida ommalashgan polimeraza Lanzug reaktsiyasi genetika bilan uzviy bog'liqdir. muayyan shaxsni aniqlash uchun jinoiy tergovchi bilan muvaffaqiyatli bog'lanadi, veterinariya tibbiyotini tashkil etish uchun kema tibbiyotida, veterinariya tibbiyotida, hayvonlar uchun klinika sifatida yo'lda mulk sotib olish mumkin, shuningdek, boshqa sohalarda (sanoat, qishloq hukumati va boshqalar).

Video: PLR - bu turg'unlikning mohiyati

Bakteriyalar genetikasi Boshqa faoliyat uchun ma'lumot.

Polimeraza Lanzug reaktsiyasi

Polimeraza Lanczug reaktsiyasi tahlil qilinayotgan namunadagi (jumladan, biologik materialda yoki sof madaniyatda) bir qator DNK molekulalarining katta ko'payishiga (amplifikatsiyasiga) imkon beradigan usuldir.

Mikrobiologiyada diagnostika usuli sifatida PLR ning asosiy afzalliklari juda yuqori sezuvchanlikdir, bu namunalarda patogenlarning juda past konsentratsiyasini aniqlashga imkon beradi, shuningdek, jonzotlarni umumiy, tur yoki subspesifik bo'yicha aniqlash imkonini beruvchi tartibga solinadigan o'ziga xoslikdir. Daraja. PLR ning asosiy qismi uning yuqori sezuvchanligi bilan bog'liq - namunalar DNKni ijobiy nazoratdan yoki PLR mahsulotidan osongina ifloslantirishi mumkin, bu esa salbiy-musbat reaktsiyaga olib keladi. Bu PLRni aralashtirish va tayyor PLR mahsulotlari bilan ishlashni amalga oshiradigan onglarga qattiq cheklovlar qo'yadi.

PLR o'tkazildi. Quyidagi komponentlarni birlashtirish uchun reaktsiya aralashmasi tayyorlanadi:

Men kuzatilgan namunadan DNKni ko'rdim,

Buferniy Rozchin

Mg2+ ionlari (ferment uchun zarur),

Ikki primer aniqlangan turli DNK ketma-ketliklarining uchlarini to'ldiruvchi bir zanjirli qisqa DNK molekulalari (ko'pincha uzunligi 18-24 nukleotidlar).

Sumish deoksinukleotid trifosfatlar.

Issiqlikka chidamli DNK polimeraza (ko'pincha vikorizatsiyalangan Taq polimeraza - polimeraza Termus aquaticus).

Keyin bu reaktsiya kuchaytirgichga joylashtirilishi mumkin, bu aslida termostat tomonidan dasturlashtirilgan. Kuchaytirgichda harorat o'zgarishining 30-40 tsikli amalga oshiriladi. Ushbu tsikllardan teri uch bosqichdan iborat (bo'lim 1-rasm):

Denaturatsiya (harorat 94 ° Vt) - suv nayzalari yorilib, DNK nayzalari ajralib chiqadi.

Primerlar tushib ketdi (harorat 50-60 ° C atrofida) - primerlar DNK ketma-ketliklarining uchlariga qo'shiladi. Umuman olganda, pastroq haroratda, kuzatilgan bo'lakdan DNK chiqishining ko'tarilishi (renaturatsiya) energetik jihatdan samaraliroq bo'ladi, chunki reaktsiya aralashmasidagi primerlarning kontsentratsiyasi ko'plab kattalikdagi ketma-ketlikda DNK kontsentratsiyasidan kattaroqdir (uchun). Masalan, PLR ning kob sikllarida), shuning uchun primerlarning reaktsiyasi DNK orqali davom etadi. Erish harorati primerlarning erish (denaturatsiya) haroratiga qarab tanlanadi.

Cho'zilish (harorat 72 ° C) - DNK polimeraza uzoq DNK matritsasining primerlarini ishlab chiqaradi. Harorat vikorizatsiyalangan DNK polimeraza ishlab chiqarish uchun optimal haroratni ko'rsatadi.

Natijalarni aniqlash PLR ning turli versiyalarida farqlanadi va "PLR turlari" bo'limida tasvirlangan.

PLR dinamikasi

Erta PLR sikllarida bir qator qo'sh DNK molekulalari, ularning kattaligi primer qo'nish joylari orasidagi joylashuvi bilan belgilanadi, teri tsikli bilan o'zaro ta'sir qiladi. Shu tarzda, ajratib olinadigan oz miqdordagi mavjud DNK molekulalari yaratiladi (bo'lim 2-rasm).

Shunday qilib, dastlabki tsikllarda PLR mahsulotining kuchi m * 2 n formulasi bilan tavsiflanadi, bu erda m - namuna DNKsining rentabelligi, n - tsikllar soni. Keyin reaksiya platoga etadi. Bu reaksiya mahsulotining to'planishi, primerlar va deoksinukleotid trifosfatlar kontsentratsiyasining pasayishi, shuningdek, pirofosfat konsentratsiyasining ortishi (3-rasm) orqali sodir bo'ladi.

Riznovidi PLR

PLR konventsiyasi

PLR reaktsiyasining ushbu versiyasida tsikllar soni (30-40) tanlanadi, shundan so'ng reaktsiya aralashmasida vulqon DNK molekulalarining to'planishi tahlil qilinadi.

Diagnostik usul sifatida varikoz tomirlarida PLRni bosqichma-bosqich aniqlashning ushbu varianti aniq usuldir. Ijobiy reaktsiya tasvirda topilgan DNK molekulalarining izlari mavjudligini ko'rsatadi. Uning mavjudligi haqida ma'lumot berish uchun salbiy reaktsiya. Chiqarilgan DNK molekulalarini miqdoriy baholash platoga javob berish orqali mumkin emas.

Mahsulotni aniqlashning asosiy usuli - agaroz yoki poliakrilamid jellarida elektroforez. PLR mahsulotlari molekulyar og'irligini kamaytirish uchun elektr maydoni ostida jelda ajratiladi. Jel tarkibida interkalatsiya qiluvchi zirk (DNK bilan bog'langan holatda floresan - ko'pincha bromid etid) mavjud. Shunday qilib, ultrabinafsha nurlar ta'sirida, kerakli molekulyar massaning DNKsini ko'rsatadigan belgining mavjudligi yoki mavjudligini aniqlash mumkin bo'ladi. Diagnostik maqsadlarda PLRni o'tkazish soati davomida reaktsiyaning ijobiy va salbiy nazorati doimo o'rnatiladi, bu esa bir xil belgilarga olib keladi (bo'lim. 4-rasm).

PLR real vaqtda

PLR ishlab chiqarishning ushbu versiyasida PLR mahsulotining reaktsiya aralashmasidagi kuchi reaktsiya jarayonida doimiy ravishda qayd etiladi. Bu reaksiya egri chizig'ini (3-rasm) hosil qilish va undan kelib chiqib, zarrachalardan bir qancha turli DNK molekulalarini ajratib olish imkonini beradi.

Haqiqiy vaqtda amalga oshiriladigan PLR turlaridan biri to'g'ridan-to'g'ri reaktsiya aralashmasiga (ko'pincha vikoristik SYBRGreen) qo'shiladigan vikoristik interkalatsiya qiluvchi vositadan foydalanishdir. Yana bir turi - PLR mahsulotining o'rtasida joylashgan bo'shliqqa ulangan floresan problarning turlaridan birini qo'llash, bu aniqlashning o'ziga xosligini oshirishga imkon beradi (5-rasm). Reaksiya davomida lyuminestsentni aniqlash doimiy ravishda amalga oshiriladi.

Tezkor aniqlash imkoniyatidan tashqari, konventsiyaga muvofiq real vaqtda PLR ning boshqa afzalliklari ham ochib berilgan. PLR ning ushbu versiyasi sodda, tezroq va shuningdek, boshqa zarrachalarning ifloslanishini kamaytiradigan PLR mahsulotlari bilan quvurlarni ochishni talab qilmaydi. Asosiy kamchilik - bu asl nusxaga nisbatan floresansni aniqlash qobiliyatining ortishi tufayli kuchaytirgichning yuqori ishlashi.

Raqamli Kilkisna PLR

PLR ning yangi, qimmat va hali ham past kenglikdagi varianti, bu namunadagi DNKning kuchini aniqroq aniqlash imkonini beradi. Ushbu versiyada lyuminestsent barnberry o'z ichiga olgan aralashmaning reaktsiyasi ko'p miqdordagi mikroskopik hajmlarga bo'linadi (masalan, emulsiyadagi tomchilar). PLR dan o'tkazilgandan so'ng, tomchilarning qaysi qismi ijobiy reaktsiyaga ega ekanligi tahlil qilinadi va, ehtimol, floresans kuzatiladi. Bu qism har bir odamda topilgan DNK molekulalari soniga mutanosib bo'ladi.

Reversal transkripsiyadan PLR

PLR ning bu yoki boshqa versiyasidan oldin revertaz fermenti yordamida teskari transkripsiya (RNK dan DNKga) reaktsiyasi inhibe qilinadi. Shunday qilib, bu usul RNK molekulalarini aniq aniqlash imkonini beradi. Bu RNK viruslarini aniqlash yoki ma'lum bir genning transkripsiya darajasini (mRNK) aniqlash uchun ishlatilishi mumkin.

Malyunok 1. Etapi PLR. Primerlar qizil rang bilan belgilangan.

Malyunok 2. PLR paytida primerlar bilan o'ralgan qo'sh DNK molekulalarining to'planishi.

Malyunok 3. Namunada topilgan DNK molekulalarining turli konsentratsiyasida PLR reaktsiyasining dinamikasi. (a) - eng yuqori konsentratsiya (b) - oraliq konsentratsiya (c) - eng past konsentratsiya

Malyunok 4. PLR mahsulotlarining agaroz elektroforezi. K+ - ijobiy nazorat (aniqlanayotgan DNK mavjudligi ortida). 1-7 - qo'shimcha belgilar (shundan 1-2 ijobiy, 3-7 - salbiy). K-salbiy nazorat (video DNK sukana DNK). Ko'pgina hollarda, butun mahsulotga qo'shimcha ravishda, ko'proq engil nonspesifik reaktsiya mahsulotlari (primer dimerlari) ko'rinadi.

Malyunok 5. Soatda vikoristannya PLR soati ostida aniqlash usullari. (a) - interkalatsiyalangan barnacle - ikki zanjirli DNK bilan bog'langanda lyuminestsatsiyalanadi (b) - Taqman zondi - floresans DNK zondi florofor bazasida 5'-3' endonukleaza faolligi bo'lgan DNK polimeraza tomonidan parchalanganda sodir bo'ladi. o'chirgich. (c) – MolecularBeacon zondi – floresansiya zondning butun bo‘lagi bilan masofaviy florofor va o‘chirgich bo‘shlig‘i orqasidagi gibridlanish jarayonida paydo bo‘ladi (d) – LightCycler zondlari – o‘tkazilgan zondlarni (FRET) gibridlashda akseptorning floresansi paydo bo‘ladi.

Polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PLR, PCR) biologik virusdan DNK fragmentlarining (genlarning) anonim nusxalarini olib tashlash usulidir.

PLR ning molekulyar biologiya usuli sifatida mohiyati miyadagi maxsus fermentlar yordamida qo'shiq genining (DNK kengaytmasi) keng miqyosli namunaviy nusxasida yotadi. in vitro. PLR ning muhim xususiyati ma'lum bir aqlga mos keladigan DNKning (genning) ma'lum bir qismining nusxasini olib tashlashdir. DNKni nusxalash jarayonining sinonimi "amplifikatsiya" dir. DNK replikatsiyasi in vivo Siz kuchaytirgichdan ham foydalanishingiz mumkin. Biroq replikatsiya natijasida Lankug polimeraza reaksiyasi jarayonida DNK ning qisqa bo‘laklari (maksimal 40 000 juft nukleotid) kuchayadi.

Asosiy tamoyillar

Bundan tashqari, PLR - bu takrorlanadigan harorat tsikllari davomida in vitroda DNK fragmentlarining karbonaza nusxasi. Reaktsiya jarayoni bir harorat aylanishida qanday sodir bo'ladi?

Nukleotid nayzasining sintezi DNK polimeraza fermenti tomonidan amalga oshiriladi. Biroq, boshoqning ishlashi uchun fermentga boshlang'ich platforma kerak. Maydanlar singari, "primerlar" (urug'lar) 15-20 nukleotidgacha bo'lgan sintetik oligonükleotidlar vazifasini bajaradi. Ikkita primer (oldinga va teskari) mavjud bo'lib, ular DNK shablonining bo'limlarini to'ldiradi va primerlar bilan o'ralgan DNK fragmentining o'zi DNK polimeraza tomonidan ko'chiriladi. Polimerazaning ishi DNK shablonining ketma-ketligini to'ldiruvchi nukleotidlarning ketma-ket qo'shilishida yotadi. Timning o'zi bitta harorat aylanishida yana ikkita yangi DNK parchasini sintez qiladi (chunki DNK molekulasi Dolantsyujkova, keyin ikkita matritsa mavjud). Shunday qilib, 25-35 sikl davomida namuna primerlar tomonidan aniqlangan DNK uchastkasining milliardlab nusxalarini to'playdi. Yopiq tsiklning tuzilishini quyidagicha ifodalash mumkin:

1. DNK denaturatsiyasi (erishi, DNK nayzalarining parchalanishi) - 95 ° C - 1 yoki 2 hvilin;
2. tushib ketgan primerlar (primerlar DNK shabloniga bog'lanadi, bu bosqichning harorati primerning nukleotid tarkibi bilan belgilanadi) - 60 ° C (masalan) - 1 hvilina;
3. DNKning cho'zilishi (polimeraza DNKni sintez qiladi) - 72 ° C - 1 soat (fragment sintez qilinmaguncha bir soatga qoldiring).

Laboratoriyada Lanziug polimeraza reaktsiyasi usulini sinab ko'rishning amaliy asosi quyidagilardan iborat bo'lishi kerak:

1. (yoki yana nima termal tsikl deb ataladi);
2. s uchun tizimlar (PLR natijalarini vizualizatsiya qilish uchun);
3. tizimlar (PLR natijalarini tahlil qilish uchun);
4. (namuna tayyorlash uchun);
5. to'plam (mexanik va elektron).

PLR laboratoriyasining to'liq ishlashi uchun asosiy va yordamchi uskunalarga qo'shimcha ravishda zarur materiallar mavjud: steril uchlar, naychalar, naychalar va dispenserlar uchun tokchalar.

To'liq huquqli polimeraza Lancug reaktsiyasini o'tkazish uchun birlamchi PLR laboratoriyasidagi reagent bazasiga buferli DNK polimeraza fermenti, primerlar (tahlil qilinayotgan DNK matritsasining yadrosi va oxirini to'ldiruvchi kichik sintetik DNK fragmentlari), nukleotidlar yig'indisi kiradi. A, T, G, C). Tozalangan suv ham juda zarur.

PLR usulining afzalliklari

Tekshiruvning yuqori sezuvchanligi

Usulning sezgirligi shundan iboratki, PLRni kuchaytirish va maqsadli ketma-ketlikni aniqlash har 5 hujayrada bir marta sodir bo'lgan holatda amalga oshirilishi mumkin.

Tahlilning o'ziga xosligi

PLR boshqa mikroorganizmlarning DNKsi va xost organizmining DNKsi mavjudligida ma'lum bir yuqumli agentning DNKsini aniqlashga, shuningdek genotiplashni amalga oshirishga imkon beradi. Reaksiya komponentlarini (primerlarni) maxsus tanlab, siz tegishli mikroorganizmlarning DNKsini darhol aniqlashingiz mumkin.

PLR usulining ko'p qirraliligi

O'ng tomonda, odamlarda yuqumli kasalliklar va konjestif kasalliklarning PLR diagnostikasi uchun siz bir xil bilimlardan foydalanishingiz, namunalar (namunalar) tayyorlash va tahlillarni o'tkazish uchun universal tartib-qoidalarni, shuningdek, bir xil to'plam va reagentlarni qo'llashingiz mumkin.

Vaqtni tejash

PLR ning muhim afzalligi - madaniy mikrobiologik ishlarning bosqichlari soni. Namunalarni tayyorlash, reaktsiyalarni o'tkazish va maksimal relyef natijalarini tahlil qilish va ko'plab avtomatlashtirish. Har holda, natijalar tezda 4-5 yilga tushishi mumkin.

PLR usulining samaradorligi

O'rganilgan klinik materialning kengligi

Polimeraza Lanczyg reaktsiyasi natijasida kasallikdan nafaqat biologik material, balki ko'plab boshqa substratlar ham aniqlanishi mumkin, ularda DNK molekulalari yuqori sezuvchanlik barglari bilan aniqlanishi mumkin, masalan, suv, tuproq, oziq-ovqat mahsulotlari, mikroorganizmlar, va yana ko'p narsalar.

Ushbu noyob usulning barcha asosiy afzalliklari yuqori sezuvchanlik va o'ziga xoslik, yuqumli agentlarni aniqlash va har qanday inson genini genotiplash, yuqori samaradorlik va vaqtni tejash, universal Amaliy asos mavjud - hozirgi PLR usuli klinik diagnostikada keng qo'llanilishi mumkin, tibbiy amaliyot va boshqa sohalardagi ilmiy tadqiqotlar va boyliklar.

Zastosuvannya PLR

Molekulyar biologiyaning hozirgi usuli natijasida polimeraza Lancug reaksiyasining turg'unlik sohalari xilma-xildir. U tahlil qilinadigan materiallarning kengligiga (DNKni aniqroq ko'rish mumkin bo'lgan deyarli hamma narsa tadqiqot mavzusi bo'lishi mumkin), shuningdek tanlangan primerlarga boy. PLRni amalga oshirishning asosiy yo'nalishlari:

klinik tibbiyot

• yuqumli kasalliklar diagnostikasi
• Retsession kasalliklar diagnostikasi
• mutatsiyalar aniqlangan
• genotip
• klinik texnologiyalar
• genetik pasportlarni yaratish

ekologiya

• dovkillarning rivojlanishini kuzatish
• oziq-ovqat mahsulotlarini tahlil qilish
• genetik modifikatsiyalangan organizmlarni (GMO) tahlil qilish

kema tibbiyoti va sud tibbiyoti

• Shaxsiy identifikatsiya
• vatanning o'rnatilishi

farmakologiya

veterinariya tibbiyoti

ilmiy tadqiqotlar (molekulyar biologiya, genetika)

PLR laboratoriyasini tashkil etish

Shartnoma tuzish uchun ma'lumot

Ism	Biz haqimizda	Virobnitstvo	Usul	Cat.No.

PLR - infektsiyalarni tashxislash, turli yuqumli kasalliklarni aniqlashning tezkor va yuqori aniqlikdagi usuli. Boshqa tahlillar o'rtasidagi farq nima?

Ushbu qisqartma Lanzug polimeraza reaktsiyasi sifatida ochiladi. Vikipediyaga ko'ra, Keri Mullis 1983 yilda tug'ilgan, Amerika tarixi. Uning hissasi uchun u Nobel mukofotidan mahrum bo'ldi.

Oxirgi marta PLR faqat ilmiy usul yordamida g'alaba qozondi, shundan so'ng u tibbiyot tomonidan muvaffaqiyatli o'rnatildi. Tekshiruvning mohiyati DNK va RNK asosida infektsion agentni tan olishdan iborat. Teri kasalligi, DNKga kirib, uning tuzilishini o'z turiga o'zgartiradi. O'zgartirilgan DNKni ko'rgandan so'ng, laborant odamlarda kasallik qanday paydo bo'lishidan xabardor bo'ladi. PLR ning boshqa afzalliklari orasida:

1. DNKdagi "izni" yo'qotgan infektsiyaning asosiy sababini aniqlash. Ko'pgina kasalliklar aniqlanganda, ularning barchasi qaerdan boshlanganini aniqlash kerak. Va to'g'ri tashxis qo'yish va samarali davolanishni tanlash uchun Lanzug reaktsiyasi juda katta ahamiyatga ega;
2. U PLR ga DNK o'zgarganda va transformatsiyaning ma'lum bir bosqichida o'rnatiladi. Bu shubhali infektsiyalarni istisno qilish uchun kerak;
3. PLR diagnostikasi sezgir va bitta bakteriya va viruslar mavjudligini aniqlaydi. Noto'g'ri tavsiya etilgan vannadan yoki vannaning rejalashtirilmagan uzilishidan keyin qonda hidlar yo'qolishi mumkin. PLR ni dekodlashda tashxis qo'yilgan minimal miqdor - mijozning 10 kuni. Boshqa sinov usullari kichikroq;
4. Patogen mikroorganizmlar PPSS belgilarining namoyon bo'lishiga qarab aniqlanadi. Erta bosqichda aniqlangan kasallik rivojlangan shakl kabi uzoq davom etmaydi;
5. Kasallikning PLR natijalari uni tezda tugatish uchun olinadi. Infektsiyalarni aniqlash uchun 4-6 yildan bir oz ko'proq vaqt kerak bo'ladi. Shifrni hal qilish bilan birgalikda butun jarayon 1-2 kundan bir oz ko'proq vaqtni oladi;
6. Bir vaqtning o'zida 5-6 ta test o'tkazish uchun DNK materiali olinadi. Kasal odam ko'p marta smeardan o'tish imkoniyatiga ega bo'lmaydi;
7. PLR va infektsiyani kuzatish to'xtamaydi, bu soha barqaror rivojlanmoqda. Sezuvchanligi yuqori bo'lgan yangi test tizimlarining ochilishi bilan kuzatuvni o'tkazish ehtimoli kamayadi. Ilgari u faqat megapolislar aholisi uchun mavjud bo'lgan bo'lsa, endi hududlardagi shifoxonalar shifokorlari kasalliklarni davolashni ularsiz tasavvur qila olmaydi.

PLR usulining xususiyatlari:

1. Aniqlik (tuzatishlar minimal va ularning chastotasi 0,01% dan oshmaydi);
2. Sezuvchanlik (sinov qon va smeardagi individual bakteriyalarni "hisoblaydi");
3. O'ziga xoslik (PLR ko'pincha muhim bosqichga qadar o'zini namoyon qilmaydigan infektsiyalarni aniqlaydi);
4. O'ziga xoslik (boshqa tekshiruvlar hech narsani aniqlamagan vaziyatlarda natijalarni tahlil qilish).

PLR tahlili natijalari

Lanzug reaktsiyasi usuli qanday ishlaydi va tahlil qilishdan oldin qanday tayyorlanasiz?

Laboratoriya miyalarida Lanzug reaktsiyasi bir xil shikastlangan qismni aniqlash orqali boy DNK va RNK namunalarining ko'payishini uzatadi. Kislotalar ferment preparatlari yordamida kuchaytiriladi (konjugatsiyalanadi). Vikoristik fermentlardan foydalangan holda, laboratoriya yordamchisi PLR ni infektsiyadan kelib chiqqan ushbu va boshqa kasalliklarning alomatlaridan tekislash uchun patogen DNK fragmentining etarli nusxalarini olib tashlaydi.

Qoida tariqasida, namuna olish yoki smear orqali olingan biologik materiallar sinovdan o'tkaziladi. Identifikatsiya qilish uchun (jinsiy yo'l bilan yuqadigan infektsiyalarni dekodlash) PLR uchun epidermis, bachadon bo'yni yoki bachadondan smear olinadi. Ba'zida vikoristlar ham jang qilishadi.

Gepatit, toksoplazmoz yoki OIV mavjudligini tasdiqlash yoki aniqlash uchun venadan qon oling. Barmoqdan olingan qon ko'pincha sut-salbiy natijalar beradi. Mononuklyoz xachir tomog'i materialini yig'ishdan keyin tashxis qilinadi. Sil kasalligi balg'am to'planganidan keyin aniqlanishi mumkin, chunki yarali bemorlarda aniq ko'rinadi.

PLR uchun bachadon va bachadon bo'yni smear - bu oddiy tahlil, bu bilan hech qanday aldash yo'q. Tadbirdan 2-3 kun oldin sizni rasmiy hayot kechirishga undaydi. Hozirgi vaqtda maxsus gigiena uchun tabiiy asosda jel va sut ishlatiladi. Siz jo'mrakdan iliq suv ichishingiz mumkin. Yuvishni to'xtating - laboratoriya yoki shifokor kabinetiga jarohat oldidan kechqurun.

Qo'ziqorinni kremlar, malhamlar, shamlar va spreylar yordamida davolash ham muhim ahamiyatga ega. Birinchi tos bo'shlig'ida smear hayzdan keyin yoki darhol keyin olinadi. To'g'ri natijalarga erishish uchun PLR smearini yig'ishdan oldin 2-3 yil davomida hojatxonaga bormaslik tavsiya etiladi.

Lanziug reaktsiyasi bo'lgan odamlarda uretradan tampon olinadi. Biologik material urug'ga kiritilgan steril zond yoki paxta sumkasi yordamida yig'iladi. Jarayonning bir soati davomida siz ozgina noqulaylik yoki jigarning shishishiga duch kelishingiz mumkin. Odamlar ham doimo jinsiy aloqa va gigiena haqida o'rganishlari kerak. Tahlildan oldingi davrda antibiotiklar va boshqa preparatlar bilan davolash belgilanadi. Yig'ishdan keyin noqulaylik davom etsa, imkon qadar tezroq klinikaga borish tavsiya etiladi.

Bemorning qon tekshiruvidan o'tishi yoki bemorning organlaridan olingan smear qabul qilinishi mumkin. Genetik material PLR kuchaytiruvchi qurilmaga joylashtiriladi va u erda fermentlar qo'shiladi. DNK 90-95 ° C gacha qizdiriladi, to lanyard shish paydo bo'lguncha. Bu jarayon denaturatsiya deb ataladi. Reaktorning ish soati davomida bir DNK va RNK namunasidan tahlil qilish uchun minglab nusxalar yaratiladi (reaktsiyani dekodlash).

PLR diagnostikasi natijalari

Lanzug reaktsiyasi infektsiyaning og'irligini va aniq asoratlar sonini ko'rsatadi. Qolgan jinslarning ochilishi genotipni o'zgartirish qobiliyatini aniqlash uchun inson DNKsiga mutatsiya genlarini individual ravishda kiritishdir.

PPR infektsiyasining tashxisi nimani ko'rsatadi?

Tahlil natijalarining dekodlanishi malakali shifokorga aniq ko'rinadi. Lanczyg reaktsiyasining kuchi bizga bunday kasalliklarning mavjudligini tasdiqlash yoki aniqlash imkonini beradi:

Ushbu ro'yxatdan ko'rinib turibdiki, PLR diagnostikasi shifokorlarga cheklangan imkoniyatlarsiz juda ko'p ixtisoslashgan mutaxassisliklarni taqdim etadi. Usul pulmonologiya, virusologiya, yuqumli kasalliklar, onkologiya, gastroenterologiya, gematologiya, ginekologiya va urologiyada qo'llanilishi mumkin.

PLR shifrini ochish: natijalar

Lancug reaktsiyasining tahlillari aniq patologiyalari va surunkali kasalliklari bo'lgan teri bemor uchun shifokorlar tomonidan individual ravishda baholanadi. PLR tahlillari natijalari, yuqorida aytib o'tilganidek, patogen bakteriyalarning o'ziga xos xususiyatlarini ko'rsatadi. Ular bilan shug'ullanayotganda, shifokor kasallikning og'irligi va bosqichini belgilaydi. Ushbu ko'rsatkichlarga asoslanib, dorilarning dozasi va davolash kursining davomiyligi qo'shimcha ravishda ko'rsatiladi.

Salbiy PLR natijasi to'plangan biologik material har kuni har qanday virus yoki infektsiyani ko'rsatishini anglatadi. Ijobiy PLR - bu signaldan oldin signal. Shuningdek, bemorning qonida va boshqa biologik joylarida infektsiya aniqlangan.

Qiymatlar minimal bo'lgani uchun, siz nafaqat kasallikning faol rivojlanishi haqida, balki kasallikning oddiy mavjudligi haqida gapirishingiz mumkin. Infektsiyaning oddiy tashuvchisi, faqat PPRda o'zini namoyon qiladi, lekin odatiy boshqa alomatlarni ko'rsatmaydi, doimo shifokor bilan maslahatlashishi kerak.

Vahima qo'ymaslik va fanga ma'lum bo'lgan viruslarning ko'pchiligini antibakterial preparatlar bilan davolash mumkinligini esdan chiqarmaslik kerak. Ularni tanlash va samarasiz bo'lgan taqdirda bittasini almashtirish shifokorning malakasidan mahrum bo'lishi mumkin, bu va boshqa kasalliklarni davolashdan dalolat beradi.

PLR shifrini ochish nafaqat shifokorning ixtiyori bilan, balki hokimiyatning ixtiyoriga ko'ra ham amalga oshirilishi mumkin. Ko'pincha biz jinsiy yo'l bilan yuqadigan kasalliklar ehtimolidan qochish uchun yaqin kelajakda homilador bo'lishni rejalashtirgan ayollardan qo'rqamiz. Bemor bilan mintaqaviy konsultatsiyaga qo'yilganda, to'liq tashxis qo'yishning hojati yo'q.

PLR turli sabablarga ko'ra kam sonli abort yoki abort qilgan majburiy ayollar uchun buyuriladi. EBC dan oldin urug'langan tuxumni chiqarib yuborishning barcha sabablarini aniqlash uchun tahlil o'tkaziladi.

Odamlar ko'pincha PLRni ozod qilingandan keyin, qandaydir bayram romantikasi yoki to'y vaqtida amalga oshiradilar. Diagnostika ularga o'z hayotini va potentsial jinsiy sheriklarning sog'lig'ini xavf ostiga qo'ymaslikka yordam beradi.

Ko'pincha, PLR bemorning embrion bosqichida kasallikdan xalos bo'lish uchun yagona imkoniyatdir, agar keraksiz xavf qiyin sayohat bilan murakkablashsa.

Yuqumli kasalliklarni tashxislash uchun PLR usuli yordamida smear muhimroq bo'lishi mumkin:

• Yuqumli kasalliklar va kasalliklarning bevosita diagnostikasi.

Laboratoriya diagnostikasining ko'plab an'anaviy usullari turli bilvosita belgilar uchun kundalik kasalliklarni aniqlashga tayanadi. Masalan, Elishay diagnostikasi bemorning qonida aniqlangan oqsillarga asoslangan bo'lib, ular yuqumli agentlarning parchalanishi mahsuloti bo'lib, ular asosida shifokor boshqa tashxis qo'yishi mumkin. PLR tahlil usuli bemordan olingan materialda kasallikning o'ziga xos DNK namunasi mavjudligini to'g'ridan-to'g'ri ko'rsatadi.

• PLR diagnostikasining yuqori o'ziga xosligi.

Tahlil jarayonida o'rganilgan material o'ziga xos va ma'lum bir organizm uchun - bakteriya yoki virus uchun kuchga ega bo'lgan DNK fragmentini ko'rsatadi. Bu DNK qismi noyobdir va er yuzidagi hayvonlar infektsiyasi uchun xos emas.

• PLR ning yuqori sezuvchanligi.

Agar bemordan olingan materialda bir hujayradan kam bakteriya yoki virus bo'lsa, infektsiyalar paydo bo'lishi mumkin. Boshqa immunologik va mikrobiologik diagnostika usullari bilan solishtirish mumkin: PLR tahlilining sezgirligi - har bir namuna uchun 10-100 hujayra, boshqa usullar - 103-105 hujayra.

0Masiv (=> Tahlillar) Massiv (=> 2) Massiv (=>.html) 2

• PLR tahlilining ko'p qirraliligi.

PLRni tekshirish uchun deyarli har qanday materiallardan foydalanish mumkin, hatto ular boshqa usullar bilan tekshirish uchun mavjud bo'lmasa ham: shilimshiq, so'qmoqlar, qon, zardob, balg'am, eyakulyatsiya, epiteliya hujayralarining parchalanishi - parchalar va boshqalar. INFEKTSION har qanday biologik jarayonda sodir bo'lishi mumkin. materiallar va to'qimalar.

• PLR tahlili natijalarini qo'llab-quvvatlashning yuqori darajasi mavjud.

Bemordan tahlil qilish, reaktsiya mahsulotlarini aniqlash, avtomatlashtirilgan PLR kuchaytirish uchun olingan materialni barcha qayta ishlashning yagona usuli 4-5 yil ichida yangi PLR tashxisini qo'yish imkonini beradi. Shu bilan birga, kuzatishning madaniy usullariga bir soatdan ko'proq vaqt sarflanadi - ko'p kundan bir necha kungacha, chunki hujayra madaniyatida patogenni ko'rish va keyin uni rivojlantirish kerak.

• Har qanday turdagi infektsiyani tashxislash imkoniyati.

PLR usulining yuqori sezuvchanligi infektsiyani nafaqat kasallikning o'tkir bosqichida tashxislash, balki surunkali infektsiyalarni aniqlash va bitta bakteriya va viruslarni aniqlash imkonini beradi.

PLR usuli yordamida smear flora smear bilan aniqlanmaydigan infektsiyalarni aniqlashga imkon beradi: xlamidiya, ureaplazmoz, mikoplazmoz, genital gerpes.

Tekshiruv usuli va PLR diagnostikasining muhim afzalliklari qanday? PLR diagnostikasining kamchiliklari quyidagilardan iborat:

• Ijobiy natijaga erishish imkoniyati

PLR tahlili, agar infektsiya allaqachon o'lik bo'lsa, antibiotiklar tomonidan "o'ldirilgan" va o'lik hujayralar hali ham bemorning to'qimalarida joylashgan bo'lsa, ijobiy natija ko'rsatishi mumkin. Qanday qilib bu mumkin? Juda oddiy. Masalan, infektsiya epiteliya to'qimalarida (organlarning yoki ko'zlarning shilliq qavatida) yashaydi. Bu ikkalasiga ham yoqdi. Hujayralarning epiteliyasini "yangilash" uchun bir soat kerak bo'ladi. Agar material hujayralar to'liq yangilanishidan oldin shifokor tomonidan olib qo'yilgan bo'lsa, materialda infektsiyaning o'lik hujayralari bo'lishi mumkin. Klitini, shubhasiz, genetik materialni - tananing DNK yoki RNKsini olib tashlaydi, bu PLR o'ylaydi. PLR o'lik hujayralarni tiriklardan ajratmaydi: u DNKni qidiradi va ularni ko'p miqdorda "klonlaydi". Bunday tahlilning natijasi ijobiydir. Aslida, biz gibnopozitiv ekanligimiz haqiqat.

PLR ning o'lik infektsiyani tirikdan "tiklash" ga qodir emasligi PLRni aniqlash va davolash samaradorligini nazorat qilishni qiyinlashtiradi. Asosiy qoida, albatta, infektsiyaning o'lik ortiqcha miqdori o'rtacha 4-8 yil davomida omon qoladigan tanadan butunlay yo'q qilinishini ta'minlashdir. Shuning uchun, qolgan antibiotik tabletkalarini qabul qilgandan so'ng, PLR usuli davolash samaradorligini kuzatish uchun ishlatilishi mumkin va kerak.

gastroenterologiya diagnostika majmuasi - 5360 rubl

BEREZNIYDA TILKI tejamkorlik - 15%

1000 rubl EKGni dekodlashdan olish

- 25%asosiy
shifokorga murojaat qiling
dam olish kunlarida terapevt

980 rub. hirudoterapist bilan birinchi uchrashuv

terapevt bilan uchrashuv - 1130 rubl (muqobil ravishda 1500 rubl) "Faqat hafta davomida, shanba va haftalarda terapevtga 25% chegirma bilan murojaat qilish - 1500 rubl o'rniga 1130 rubl (diagnostika protseduralari narxlar ro'yxatiga muvofiq to'lanadi)

Keyingi bosqichda taqiqlashni nazorat qilish boshqa madaniy usul yordamida yoki ekish orqali amalga oshirilishi mumkin: faqat ko'payadigan tirik mikroorganizmlar zo'ravonlik qilmaslik belgisi bo'lib xizmat qilishi mumkin.

• Gardnerellyozni tashxislash uchun PLR tahlilini qo'llash tavsiya etilmaydi, chunki gardnerelli - bu kasallikka chalinganlar, kam sonli hollarda, odatda tuproqda yashaydilar. Vikoristik PLRga ega bu bakteriyalarning DNKsi tez orada yo'qoladi. Gardnerella smearda ko'rinmaydi va bu holda bakterioskopiya gardnerellyozni tashxislash va davolashni kuzatish uchun etarli usuldir.
• Mikroorganizmlarning xilma-xilligi

Har qanday mikrob o'zgarishi mumkin va DNK bilan bir vaqtda. Bu galusdan eng chiroyli dumba gripp virusidir. Bir marta kasal bo'lgan odamda virusga qarshi antikorlar paydo bo'ladi. Sof nazariy jihatdan, agar biz bir marta gripp bilan kasallangan bo'lsak, xuddi gripp kabi, yana kasal bo'lib qolishimiz bizning aybimiz emas. Tomog'imiz deyarli og'riyapti. Sababi nima? Virus "mutatsiyaga uchraydi", o'z genomini biroz "o'zgartiradi" va bizning immunitet tizimimiz, antikorlarimiz endi eski mehmonni yangi ko'rinishda "tanimaydilar". Gripp bilan yana kasal bo'lib qolganim aqldan ozgan emas...

Kuchaytirgichni (PLR test tizimi) loyihalashda ma'lum bir mikroorganizmga xos bo'lgan DNK fragmenti tanlanadi, bu o'zgarishga eng kam sezgir. U DNKning yuqori darajada konservativ deb ataladigan qismidan "tanlangan". Shu bilan bir qatorda, mikroorganizmlarning ko'pligi o'rganilayotgan organizmning ma'lum genotiplari yoki shtammlari genomda mutatsiyalarga olib kelishi mumkin, bu esa kuchaytiruvchi (klon) va shuning uchun test tizimi tomonidan ushlanmaydi.

Shunday qilib, turli xil test tizimlari bir xil PLR usulidan foydalangan holda turli laboratoriyalarda va turli klinikalarda o'tkazilgan tahlillar diametral ravishda boshqacha natijalarni ko'rsatishi mumkin bo'lgan sabablardan biridir. Mutatsiyalarni iloji boricha oldini olish uchun testlarni tartibga soluvchi standartlar ishlab chiqilgan (shu jumladan o'zaro ta'sirlarni tekshirish, shuningdek ko'rsatilgan kasallikning ajratilgan shtammlarini tekshirish), bu sinov tizimini talab qiladi, birinchi navbatda bozor va Vicoristan sizning sog'lig'ingizni tashxislash uchun ishlatiladimi, nima uchun yaxshi klinikalar va laboratoriyalar test tizimlarining qolgan avlodlari uchun Vicoristan'dan foydalanadilar? Va bizning "Euromedprestige" tibbiyot markazimiz o'z mijozlariga aniq diagnostika bilan ta'minlay oladigan kam sonli markazlardan biridir.